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1、不同灌注液对体外灌流兔肾功能和形态的影响-->提 要:目的 观察不同灌注液对体外灌流肾脏灌流量的影响,为建立体外灌流保存肾脏的技术平台做准备。方法45只健康成年新西兰白兔,无菌条件下取其左肾进行灌流,根据灌流液的不同,分为A(肝素抗凝自体全血)、B(肝素抗凝自体血+等量RPMI1640培养基)、C(异体洗涤红细胞+去纤维蛋白血浆+等量RPMI1640培养基)3组,每组15只,3只用于观察最长灌流时间,12只用于观察其它指标。以100mmHg灌注压(酚妥拉明解痉)灌流,测定0、24、48、60h肾重量、肾静脉流出液乳酸脱氢酶(LDH)活性、尿pH值、尿钠和尿钾的
2、浓度变化,及肾组织的光镜及透射电镜病理变化。结果 C组肾脏灌流时间最长(>72h),肾脏重量增加值最低(P 目前,肾脏体外保存主要是浅低温保存[1],其理论依据是降低保存器官的代谢,就能延长器官的体外保存时间。但低温保存存在保存时间短、不能同时为多个受者选配、不能对肾脏进行抗原修饰等诸多局限性。随着科学的发展,可能需要我们对供肾进行抗原或分子修饰,以降低供肾的抗原性或提高供肾对排异的耐受性。我们不是按传统的思路降低保存肾脏的代谢,而是从尽量满足保存肾脏的代谢需求的角度研究肾脏的体外保存。本研究在我们以往研究不同灌注压、不同解痉剂对体外灌流兔肾灌流量影响的基础
3、上,进一步探讨不同灌流液对常温体外灌流兔肾功能及其灌流保存时间的影响,为建立体外灌流保存肾脏的技术平台,最终建立肾库做准备。1 材料和方法1•1 实验分组 健康成年新西兰白兔45只,雌雄兼用,体质量3~3•5kg,20%乌来糖5ml/kg静脉注射麻醉动物后,无菌条件下取其左肾,根据灌流液的不同分为A、B、C3组,每组15只兔肾,于灌流0、24、48、60h观察生化指标和形态学改变,每组每时相点4只兔肾,另外A、B、C组各取3只兔肾用来观察最长灌流时间。1•2 灌流装置 用Gambo血泵作为自制肾脏灌流装置的原动力,将取下
4、的肾脏的动静脉插管分别与灌流装置动静脉端相连,将输尿管插管的末端放入尿池内,开启血泵进行体外灌流。通过三通管补充RPMI1640培养液(含环丙沙星2μg/ml),补充量与尿量相等。灌注压用储血器与肾池的高度调节;用恒温水浴锅及恒温水循环保证灌流液的温度为37℃。通过鼓泡器本论文由.51lunl/h,肾脏外观变为褐色为判断灌流肾脏死亡的标准,则A组最长存活时间为62h15min;B组最长存活时间为70h12min;C组最长存活时间为72h20min。2•2 灌流后肾脏重量增加值 灌流48h,A组肾脏重量增加值较灌流24h显著增大(0•4
5、7±0•01vs0•21±0•01,P0•05),灌流60h肾脏重量增加值(0•44±0•03,0•42±0•01)虽较24h显著增加(P3 讨论 关于对体外灌流肾脏功能状况的评价指标体系文献中尚-->无规范借鉴。我们采用了灌流肾脏重量增加值、静脉流出液LDH活性增加值、尿pH增加值、尿钠浓度增加值、尿钾浓度下降值等指标。灌流肾脏重量增加,提示组织中水分增加,灌流液内液体成分向组织间隙渗出过多,是由于灌流液中胶体渗透压低或/和血管通透性增加所致。灌流肾静脉流出液L
6、DH活性增加,提示组织细胞受损[2~4],细胞内LDH释出并进入静脉回流液。在灌流液pH值、肾组织细胞代谢和肾小管排泌功能稳定的条件,尿pH应保持稳定;若组织细胞供氧不足,无氧糖酵解增多,只要肾小管排泌功能正常,尿pH应是降低的;本实验中,灌流液pH是恒定的,灌流肾尿pH值增加只能说明肾小管的酸化功能障碍。在灌流液钠钾浓度恒定的条件下,尿钠浓度增高,尿钾浓度降低,说明肾小管的钠钾交换功能障碍[5,6]。 本实验结果表明,对比不同灌流液对体外灌流肾脏功能的影响,C组(异体洗涤红细胞+去纤维蛋白血浆+等量RPMI1640培养基)体外灌流,达72h以上(有尿),同
7、时C组灌流肾脏重量增加值、静脉流出液LDH活性增加值、尿pH增加值、尿钠浓度增加值、尿钾浓度降低值显著低于A组(肝素抗凝自体全血)和B组(肝素抗凝自体全血+等量RPMI1640培养基),C组灌流肾脏光镜和电镜下的形态学损害也显著轻于A、B两组,说明在本实验中,C组灌流液对离体灌流肾脏的保存效果最佳。 C组灌流液中,加入了等量RPMI1640培养基,具有较强的酸碱缓冲能力,同时还含有较多的氨基酸[7]、谷胱甘肽、镁等。其中本论文由.51lunedistributioninphysiologicalresponsetostressandinreddeer[J]&
8、#8226;ResVetSci,199
