白及胶对体外培养兔胆管成纤维细胞形态及活性的影响

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1、白及胶对体外培养兔胆管成纤维细胞形态及活性的影响【摘要】目的观察白及胶对成纤维细胞形态及活性的影响。方法分离培养日本大耳白兔胆管成纤维细胞，加入不同浓度白及胶进行共同培养，在光镜下观察日本大耳白兔胆管成纤维细胞形态的改变，用MTT法比色法检测日本大耳白兔胆管成纤维细胞活性。结果白及胶组成纤维细胞胞体较小，胞突少，多呈圆形，胞核较小。白及胶组0.1、1.0、10.0mg/mL白及胶在作用72h时成纤维细胞活性与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01，P＜0.05)。结论白及胶对日本大耳白兔胆管成纤维细胞形态的影响及白及胶

2、对日本大耳白兔胆管成纤维细胞活性的抑制作用，可能是白及胶防治日本大耳白兔腹腔粘连的机制之一。【关键词】成纤维细胞；白及胶；药物作用　　InfluenceofHyacinthbletilladecoctedorphologyandactivityfromculturerabbitbiliaryduct　　【Abstract】ObjectiveToobservetheinfluenceofHyacinthbletilladecoctedorphologyandactivity.MethodsFibroblasticcells

3、culturerabbitbiliaryduct.ThedifferentconcentrationofHyacintabletilladecoctedorphologyicroscope.Fibroblasticactivityetricmethod.ResultsInHyacintnbletillagroupfibroblasticcellharesmallsoma,alittlespine.Thereg/mLon72h(P＜0.01，P＜0.05).ConclusionHyacinthbletilladecocte

4、drabbitbiliaryduct.　　【KeyCO-15A型CO2培养箱为日本SANYO生产；超净工作台为天津医药净化设备厂生产；TDL-40B离心机为上海科学仪器厂生产；Anthos2010型全自动酶标仪为奥地利生产；odifiedEagle'sMedium(DMEM)营养液放入25mL培养瓶中，瓶底倒置于CO2孵育箱中2h，尽量使组织块与培养瓶壁粘附后补足含15%血清DMEM营养液培养细胞，营养液3日换液1次，待成纤维细胞至接近长满培养瓶底后，移除组织块用0.25%胰蛋白酶消化传代，待细胞生长旺盛时用于实验。　

5、　1.2.3白及胶对成纤维细胞形态的影响　　将生长良好的成纤维细胞制成细胞悬液，调整细胞密度，接种于含盖玻片的2块培养皿中，其中1块加白及胶为白及胶组，另1块加入等量的培养液为对照组，放入CO2孵育箱培养72h，待细胞基本长成单层，取出盖玻片，95%乙醇固定，染色，封片，显微镜观察，照相保留结果。　　1.2.4四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度白及胶对成纤维细胞活性的影响　　用0.125%胰蛋白酶消化成纤维细胞，细胞悬浮后加入50mL离心管中；1500r/min10min离心洗细胞2次，弃上清后加入DMEM或RPMI

6、-1640（细胞培养基）完全营养液重新悬浮细胞充分混匀。台酚兰染色，计数细胞成活率＞95%，调细胞数至1×104/mL。将1×104/mL细胞悬液充分混匀后加入96孔板中。96孔板每孔0.15mL。分别将10.0、1.0、0.1mg/mL浓度的白及胶加入96孔板，做6个平行孔。放入5%CO2孵育箱中培养分别于24、48、72h测定细胞活性。培养结束前4h掺入MTT（5mg/mL）20μL继续培养至结束，弃培养上清液加入1∶300盐酸-异丙醇溶液100μL，微量震荡器震荡10min，用2010型全自动酶标仪620nm测定O

7、D值。　　1.3统计处理　　经SPSS11.0统计软件进行方差分析，比较各组差别,以P＜0.05为有统计学意义。　　2结果　　2.1白及胶对成纤维细胞形态的影响　　对照组细胞胞体较大，胞浆丰富，胞突多，呈多角型或梭型，胞核大，有形成细胞增殖巢趋势，见图1。白及胶处理组成纤维细胞胞体较小，胞突少，多呈圆形，胞核较小。见图2。　　2.2不同浓度白及胶对成纤维细胞活性的影响　　见表1。表1不同浓度白及胶对成纤维细胞活性的影响（略）由表1可见，0.1、1.0、10.0mg/mL白及胶均在作用72h时显示出对成纤维细胞增殖具有显著

8、的抑制作用。　　3讨论术后腹腔粘连形成是一个复杂的过程，涉及到生物化学及生物物理的多方面因素。多项研究表明，受损的浆膜创面和相邻腹膜的接触是粘连形成的重要因素，所以选择保护隔离创面的方法是一种行之有效的预防措施［2］。随着细胞生物学和分子生物学的迅速发展，近年来有证据表明，成纤维细胞与术后腹腔粘连的形成有着密切关系。