白及胶对体外培养兔胆管成纤维细胞形态及活性的影响论文

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1、白及胶对体外培养兔胆管成纤维细胞形态及活性的影响论文【摘要】目的观察白及胶对成纤维细胞形态及活性的影响。方法分离培养日本大耳白兔胆管成纤维细胞，加入不同浓度白及胶进行共同培养，在光镜下观察日本大耳白兔胆管成纤维细胞形态的改变，用MTT法比色法检测日本大耳白兔胆管成纤维细胞活性。结果白及胶组成纤维细胞胞体较小，胞突少，多呈圆形，胞核较小。白及胶组0.1、1.0、10.0mg/mL白及胶在作用72h时成纤维细胞活性与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01，P＜0.05)。结论白及胶对日本大耳白兔胆管成纤维细胞形态的影响及白及胶对日本大耳白兔胆管成纤维细胞活性的抑制

2、作用.freelorphologyandactivityfromculturerabbitbiliaryduct【Abstract】ObjectiveToobservetheinfluenceofHyacinthbletilladecoctedorphologyandactivity.MethodsFibroblasticcellsculturerabbitbiliaryduct.ThedifferentconcentrationofHyacintabletilladecoctedorphologyicroscope.Fibroblasticactivityet

3、ricmethod.ResultsInHyacintnbletillagroupfibroblasticcellharesmallsoma,alittlespine.Thereg/mLon72h(P＜0.01，P＜0.05).ConclusionHyacinthbletilladecoctedrabbitbiliaryduct.【KeyCO-15A型CO2培养箱为日本SANYO生产；超净工作台为天津医药净化设备厂生产；TDL-40B离心机为上海科学仪器厂生产；Anthos2010型全自动酶标仪为奥地利生产；odifiedEagle'sMedium(DMEM)营

4、养液放入25mL培养瓶中，瓶底倒置于CO2孵育箱中2h，尽量使组织块与培养瓶壁粘附后补足含15%血清DMEM营养液培养细胞，营养液3日换液1次，待成纤维细胞至接近长满培养瓶底后，移除组织块用0.25%胰蛋白酶消化传代，待细胞生长旺盛时用于实验。1.2.3白及胶对成纤维细胞形态的影响将生长良好的成纤维细胞制成细胞悬液，调整细胞密度，接种于含盖玻片的2块培养皿中，其中1块加白及胶为白及胶组，另1块加入等量的培养液为对照组，放入CO2孵育箱培养72h，待细胞基本长成单层，取出盖玻片，95%乙醇固定，染色，封片，显微镜观察，照相保留结果。1.2.4四甲基偶氮唑蓝(MTT

5、)法测定不同浓度白及胶对成纤维细胞活性的影响用0.125%胰蛋白酶消化成纤维细胞，细胞悬浮后加入50mL离心管中；1500r/min10min离心洗细胞2次，弃上清后加入DMEM或RPMI-1640（细胞培养基）完全营养液重新悬浮细胞充分混匀。台酚兰染色，计数细胞成活率＞95%，调细胞数至1×104/mL。将1×104/mL细胞悬液充分混匀后加入96孔板中。96孔板每孔0.15mL。分别将10.0、1.0、0.1mg/mL浓度的白及胶加入96孔板，做6个平行孔。放入5%CO2孵育箱中培养分别于24、48、72h测定细胞活性。培养结束前4h掺入MTT（5mg/mL

6、）20μL继续培养至结束，弃培养上清液加入1∶300盐酸-异丙醇溶液100μL，微量震荡器震荡10min，用2010型全自动酶标仪620nm测定OD值。1.3统计处理经SPSS11.0统计软件进行方差分析，比较各组差别,以P＜0.05为有统计学意义。2结果2.1白及胶对成纤维细胞形态的影响对照组细胞胞体较大，胞浆丰富，胞突多，呈多角型或梭型，胞核大，有形成细胞增殖巢趋势，见图1。白及胶处理组成纤维细胞胞体较小，胞突少，多呈圆形，胞核较小。见图2。2.2不同浓度白及胶对成纤维细胞活性的影响见表1。表1不同浓度白及胶对成纤维细胞活性的影响（略）由表1可见，0.1、1

7、.0、10.0mg/mL白及胶均在作用72h时显示出对成纤维细胞增殖具有显著的抑制作用。3讨论术后腹腔粘连形成是一个复杂的过程，涉及到生物化学及生物物理的多方面因素。多项研究表明，受损的浆膜创面和相邻腹膜的接触是粘连形成的重要因素，所以选择保护隔离创面的方法是一种行之有效的预防措施［2］。随着细胞生物学和分子生物学的迅速发展，近年来有证据表明，成纤维细胞与术后腹腔粘连的形成有着密切关系。有研究证实，腹膜损伤后，其中有大量成纤维细胞被激活，激活的成纤维细胞自身可分泌大量细胞外基质，分泌多种细胞因子，其他多种炎型细胞分泌的炎症因子对成纤维细胞均有显著刺激作用，这些均

8、与粘连的形成有密切联系［