靶向干扰CXCR7基因表达对肝癌（HCC）细胞增殖及凋亡的影响.pdf

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1、复里孝报‘医学版FudanUUnniivvJMedSci2。u14斗～IVIar．·，’4斗1(2二)161靶向干扰CXCR7基因表达对肝癌(HCC)细胞增殖及凋亡的影响林灵韩梅梅王芳申华莉余红秀。杨芄原1,2(’复旦大学生物医学研究院上海200032；。复旦大学化学系，生命科学学院上海200433)【摘要】目的探讨CXCR7基因在不同肝癌细胞系及肝癌组织中的表达情况，并研究靶向抑制CXCR7基因表达对肝癌细胞增殖及凋亡的影响方法应用Westernblot检测不同肝癌细胞系及1O例肝癌组织中CXCR7蛋白的表达水平。采用短发夹状RNA(shorthai

2、rpinRNA，shRNA)干扰技术沉默HCCLM3与MHCC97L细胞中CXCR7基因的表达，分别采用WesternBlot和qRT—PCR检测shRNA的靶向沉默效果。通过CCK一8增殖实验与AnnexinV-FITC／PI细胞双染色研究CXCR7抑制对HCCLM3与MHCC97L增殖及凋亡的影响。结果CXCR7表达水平与肝癌细胞的恶性程度呈正相关，肝癌组织中CXCR7表达水平较癌旁显著升高。实验成功构建了9个慢病毒表达载体，其中CXCR7shRNA-566序列干扰效率最高。增殖实验显示干扰表达组细胞生长速度受到明显抑制(P<0．05)；流式细胞仪

3、分析显示干扰CXCR7表达可诱导细胞凋亡的发生。结论CXCR7表达水平与肝癌恶性程度呈正相关，靶向干扰CXCR7表达可抑制细胞的增殖能力，诱导细胞发生凋亡。【关键词】肝细胞肝癌(HCC)；CXCR7基因；短发夹状RNA(shRNA)；增殖能力；细胞凋亡【中图分类号】R735．7【文献标志码】Adoi：10．3969／j．issn．1672—8467．2014．02．004EffectsofinhibitingCXCR7geneexpressiononbiologicalcharacteristicsofhumanhepatocellularcarcin

4、oma(HCC)celllinesLINLing，HANMei～mei’，WANGFang，SHENHua—li，YUHong—xium△，YANGPeng—yuan，(InstitutesofBiomedicalSciences，FudanUniversity，Shanghai200032，China；DepartmentsofChemistry，SchoolofLifeSciences，FudanUniversity，Shanghai200433，China)[Abstract]ObjectiveToexploretheexpressionofch

5、emokinereceptorCXCR7onhumanhepatocellularcarcinoma(HCC)celIlinesandtumorsamples，andtheeffectsofCXC：R7oncellproliferationandapoptosisofHCCcelllines．MethodsWesternblotanalysiswasappliedtodetectCXCR7proteinexpressioninHCCcelllinesand10pairsofHCCspecimenswithadjacenttissues．RNAinter

6、ferencemethodofshorthairpinRNA(shRNA)wasusedtosilenceCXCR7expressioninHCCLM3andMHCC97Lcells．TheexpressionsofCXCR7mRNAandproteinweredeterminedbyqRT—PCRandWesternblot，respectively．TheeffectsofCXCR7down-regulationoncellproliferationandapoptosisweremeasuredbyCCK一8assayandAnnexinv_FI

7、TC／PIapoptosisdetection．ResultsTheCXCR7expressionwasgraduallyenhancedwithincreasingmetastaticpotentialofHCCcelllines，卫生部“艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”重大专项(2012ZX]0002012-006)；上海市卫生局基金(2009002)△CorrespondingauthorE—mail：hongxiuyu@fudan．edu．cn162复旦学报(医学版)2014年3月，41(2)andcomparedtoadjacenttis

8、suesofclinicalspecimens，CCR7expressionwashugely