研究干扰素-α对肝癌细胞增殖与凋亡的影响.doc

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1、研究干扰素-α对肝癌细胞增殖与凋亡的影响【摘要】目的：研究干扰素-α对人肝癌SMMC7721细胞的增殖及迁移的抑制作用,探讨其抗肿瘤作用的机制。方法：常规培养的人肝癌SMMC7721细胞，加入干扰素-α孵育24h后，以MTT法检测干扰素-α对肿瘤细胞增殖的影响;Boyden小室法检测肝癌细胞侵袭能力的变化，通过AnnexinV-FITC检测干扰素-α诱导SMMC7721细胞组的凋亡情况。结果：干扰素-α可以明显抑制体外SMMC7721细胞的增殖，诱导细胞凋亡，导致Boyden小室穿膜的肿瘤细胞数明显下降。结论：干扰素-α可以直接抑制体外肝癌细胞SMMC7721的增殖和迁

2、移并诱导细胞凋亡。【关键词】干扰素-α；细胞增殖和凋亡；侵袭；SMMC7721细胞[Abstract]Objective:TostudytheinhibitionsofthehepatomacelllineSMMC-7721fromproliferation，migrationbyhumaninterferon-αandtheantitumormechanism.Methods:HepatomacelllineSMMC-7721wasculturedroutinely,andafter24hoursco-incubationofhepatomacelllineSMMC-

3、7721,humaninterferon-α.MTTassaywasusedtodetecttheeffectsofhumaninterferon-αonproliferationofhepatomacelllineSMMC-7721.InvasiveabilityofhepatomacelllineSMMC-7721wasexaminedbyBoydenchambermodel.ApoptosisinhepatomacelllineSMMC-7721inducedbyhumaninterferon-αwasanalyzedbyannexinV-FITC.Results

4、:Humaninterferon-αinhibitedhepatomacelllineSMMC-7721fromproliferationinvitroandinduceditsapoptosissignificantly.Thenumberofmetastatictumorcellswassignificantlyreduced.Tumordimensionwasalsosignificantlyreduced.[Keywords]Interferon-α;Hepatoma;Cellapoptosis;Invasion;SMMC7721cellline干扰素(inte

5、rferon,IFN)是一组具有多种功能活性的糖蛋白，是由单核细胞和淋巴细胞产生的细胞因子。根据干扰素蛋白质的氨基酸结构、抗原性和细胞来源，可将其分为IFN-α、IFN-β、IFN-γ3种亚型。干扰素是一类具有抗病毒、抗增殖及免疫调节作用的细胞因子，对抗病毒性疾病和肝脏恶性肿瘤[1]以及增强机体免疫调节能力有明显效果，国内外已有干扰素作为一种肿瘤的治疗佐剂的相关报道[2，3]。肝细胞癌是一种严重威胁人类健康的恶性肿瘤，而IFN-α对实验性大鼠肝癌及临床肝细胞癌根治性切除术后的转移复发有抑制作用[4]，但干扰素抗肿瘤的机制还不十分清楚。本研究利用人肝癌细胞株SMMC772

6、1细胞建立裸鼠致瘤模型,并研究IFN-α在体外对肝癌细胞的增殖及侵袭的影响,初步探讨了其抗肿瘤的机制，以便为IFN-α对于肝癌的临床治疗应用提供理论和实验依据。1材料与方法41.1试剂人肝癌细胞株SMMC7721购自四川大学基础与法医学院免疫研究所；IFN-α购自江苏曼迪新琴纳医药有限公司；MTT购自美国Sigma公司;流式细胞仪、Boyden小室及人工基膜(Matrigel)由北华大学检验系提供。1.2细胞培养SMMC7721细胞经消化后计数,以1.5×105个/ml接种96孔板，每孔加入200μl，5%小牛血清的RPMI-1640培养基，平均分为2组：实验组加入含1

7、000U/mlIFN-α灭菌去离子水溶液50μl，对照组加入相同体积的PBS,在5%CO2、37℃培养24h。1.3MTT法检测SMMC7721细胞的增殖培养细胞加入MTT（5mg/ml）50μl/孔，继续孵育4h，加入DMSO100μl/孔,轻摇10min后检测波长A490，每组设10个复孔。细胞增殖的抑制率按照以下公式计算：（1-IFN-α培养孔细胞上清的A490/对照组培养孔细胞上清的A490）×100%1.4Boyden小室检测细胞侵袭实验参照Siegal[5]等的体外侵袭实验方法。每张膜随机选取5个高倍视野,计数穿过聚碳酸酯膜的