小分子干扰RNA对肝癌细胞株MHCC-97H增殖和凋亡及Survivin表达的影响.pdf

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1、中华实用儿科临床杂志2015年5月第3O卷第9期ChinJApplClinPediatr，May2015，Vo1．30，No．9·707··实验研究·小分子干扰RNA对肝癌细胞株MHCC一97H增殖和凋亡及Survivin表达的影响张朝霞刘子勤陈燕飞玄立田王天有【摘要】目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)对人肝癌细胞株MHCC·97HSurvivin基因表达及其增殖和凋亡的影响。方法设计、合成针对Survivin基因序列特异性siRNA，用脂质体包裹转染人肝癌细胞株MHCC一97H，实验分为3组：SurvivinsiRNA转染组(Si—survivin组)，无关siRNA转染组(NC组)和

2、无转染组(正常对照组)。采用反转录一聚合酶链反应、Westernblot技术检测SurvivinmRNA及蛋白表达；四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞增殖情况；分别以终浓度为12．5、25．0、50．0nmol／L的siRNA作用于细胞后24h，采用流式细胞仪AnnexinV／PI双染法检测细胞凋亡。结果转染后48h，Si—survivin组、NC组、正常对照组SurvivinmRNA表达水平分别为0．554-0．16、0．854-0．28、0．934-0．40，组间比较差异有统计学意义(F=414，P<0．01)；Si—survivin组最低，与NC组、正常对照组比较差异均有统计学意义(t=一2

3、0．56、一28．37，P均<0．001)。siRNA转染48h后，Si—survivin组、NC组、正常对照组Survivin蛋白相对表达量分别为0．6024-0．005、0．8354-0．007、0．993±0．003，组间比较差异有统计学意义(F=238，P<0．01)；Si—survivin组最低，与NC组、正常对照组比较差异均有统计学意义(t=一40．17、一66．03，P均<0．001)。转染后72h和96h，Si—survivin组细胞抑制率[(19．5±3．6)％、(12．04-0．9)％]显著高于NC组[(3．64-0．9)％、(一1．34-6．1)％]，差异均有统计学意义

4、(t=36．18、42．53，P均<0．05)。不同浓度siRNA作用于细胞后24h，12．5、25．0、50．0nmol／LsiRNA组、NC组和正常对照组细胞凋亡率[分别为(22．644-2．54)％、(35．374-3．28)％、(53．284-4．35)％、(8．774-1．25)％、(9．724-1．37)％]比较，组间差异有统计学意义(F=35．93，P<0．01)，不同浓度siRNA间细胞凋亡率两两比较，差异有统计学意义(t=一29．73、一38．57，P均<0．001)。结论Survivin特异性siRNA能抑制人肝癌细胞株MHCC．97HSurvivin基因表达，抑制细胞增

5、殖，促进细胞凋亡。【关键词】肝癌；Survivin；小分子干扰RNAEfectsofsmallinterferingRNAonSurvivinexpression．proljferationandapoptosisofhepatoceHularcarcino-maceBlineMHCC一97HZhangZhaoxia，LiuZiqin，ChenYanfei，XuanLhian，WangTianyou．GraduateSchoolofPekingUnionMedicalCollege，Ben100020，GinaCorrespondingauthor：WangTianyou，Email：wan

6、gtianyou@bch．COllZ．cnfAbstract]0bjectiveToobservetheeffectofsmallinterferingRNA(siRNA)targetingSurvivingeneonsur-vivinexpression．proliferationandapoptosisofhepatocellularcarcinomacellllneMHCC一97H．MethodsSurvivinse—quencespecificsiRNAwasdesignedandsynthesized．siRNA／liposomecomplexwastransfectedintoh

7、epatocellularear—cinomacelllineMHCC一97H．TheMHCC一97HcellsweredividedintoSurvlvinsiRNAgroup(Si—survivin)．nega—tivecontrolsiRNAgroup(NCgroup)andblankgroup(normalcontrolgroup)．SurvivinmRNAandproteinexpressionsw