小干扰rna干扰高迁移率族蛋白1对hepg2细胞增殖和凋亡的影响

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1、中华肝脏病杂志2010年5月第l8卷第5期ChinJHepatol，May2010，Vo1．I8，No．5361·肝癌·小干扰RNA干扰高迁移率族蛋白1对HepG2细胞增殖和凋亡的影响贺新春范学工刘洪波周蓉蓉WANGHai—chao【摘要】目的探讨小干扰RNA(siRNA)抑制高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法设计并化学合成针对HMGB1的3对siRNA分子序列(siRNAH1、siRNH2、siRNAH3)，同时设未转染对照组(Lipo组)及转染阴性siRN

2、A组(阴性siRNA对照组)。脂质体法瞬时转染HepG2细胞，通过PCR法和Westernblot检测细胞中HMGBl基因在mRNA水平和蛋白质水平的变化，利用四甲基偶氮唑盐法检测转染HMGB卜siRNA的HepG2细胞增殖情况，TdT酶介导的缺口末端标记法检测细胞凋亡情况。两组数据问比较用t检验，组内数据比较用方差分析，细胞增殖数据采用可重复双因素方差分析。结果3对特异性HMGB卜siRNA转染后，HMGB1mRNA相对表达量分别为1．147±0．024、1．014±0．042和0．435±0．055，较L

3、ipo组的1．4l1±0．065明显减少(f值分别为7．187、9．018和20．689，尸值均<0．01)；HMGB1蛋白相对表达量分别为0．369±0．035、0．340±0．028和0．097±0．020，较Lipo组的0．553±0．051明显减少(值分别为6．678、7．919和l7．287，P值均<0．01)，其中以siRNAH3抑制效果最好，抑制率可达到80％。转染siRNAH3后HepG2细胞的增殖能力受到明显抑制，与Lipo组相比，72、96、120h时F值分别为34．651、540．550

4、、3778．197，P值均<0．01，HepG2细胞凋亡指数明显增高(F=130．696，尸<0．01)。结论靶向HMGB1基因的siRNA分子片段可以有效地抑制HepG2细胞生长，促进HepG2细胞凋亡，其作用与下调HMGB1的表达有关，HMGB1可能是肝癌治疗的一个潜在靶点。【关键词】癌，肝细胞；高迁移率族蛋白1；小干扰RNAEfectofHMGB1-siRNAonproliferationandapoptosisofHepG2cellsHEXin—chun，FANXue—gong，L1UHong—bo，

5、ZHOURong—rong，WANGHai—chao．DepartmentofInfectiousDiseases，XiangyaHospital,CentralSouthUniversity，Changsha410008,ChinaCorrespondingauthor：FANXue—gong，Email：xgfan@hotmail．com[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheeffectofdecreasedexpressionofhighmobilitygroupBox一

6、1ontheproliferationandapoptosisofHepG2cells．MethodsThreespecificsiRNAsofHMGB1weredesignedandsynthesized，andweretransientlytransfectedintoHepG2cellsbyLipofectamineTM2000．TheHMGB1expressioninHepG2cellswasdetectedbyRT-PCRandWesternblottingrespectively．Theproli

7、f-erationactivityinvitrowasassessedbyMTTassay．InsituapoptosisWasevaluatedbyterminaldeoxynucleotidyltrans~rase—deoxyuridinetriphosphatenickendlabeling(TUNEL)assay．ResultsAllofthesespecificHMGB1一siRNAs(1，2，3)eficientlyandspecificallyinhibitedtheexpressionofth

8、eHMGB1gene，andthelevelsofHMGB1mRNAwere1．147±0．024，1．014±0．042，0．435±0．055，respectively，inHMGB1-siRNAstrans—fectiongroup，whichweresignificantlylowerthanthatinLipofectamineTM2000alonegroup(1．411±0．065，P<