牛传染性鼻气管炎病毒DQ株gD基因表达及其间接ELISA方法的建立和初步应用.pdf

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1、ChineseJournalofVeterinaryMedicine中国兽医杂志2011年(第47卷)第2期3牛传染性鼻气管炎病毒DQ株gD基因表达及其间接ELISA方法的建立和初步应用董华兴，侯喜林，谢金鑫，张佩鑫，柳强，刘鹏，王延涛·(黑龙汀八一农垦大学动物科技学院，黑龙江大庆163319)摘要：以原核表达的牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)重组gD蛋白作为包被抗原，建立检测IBRV抗体的间接ElISA方法。构建pET30a—gD重组质粒，在大肠杆菌中表达IBRV重组gD蛋白，Western—blot检测该重组蛋白具有良

2、好的免疫活性。通过方阵试验确定了抗原的最适包被浓度为2．5~g／mI，血清最佳稀释倍数为1：200，酶标二抗最佳稀释倍数为1：5000，与病毒中和试验、全病毒EIISA方法的检测结果符合率分别为87．5、92．5。用该法对黑龙江部分地区采集到的863份牛血清样品进行检测，结果阳性率为82．27。本试验建立的间接ElISA方法可用于IBR的检测和流行病学调查。关键词：牛传染性鼻气管炎病毒；重组gD蛋白；间接EIIsA；抗体检测中图分类号：$852．659．6文献标识码：A文章编号：05296005(2011)02—0003—

3、03EstablishmentandpreliminaryapplicationofanindirectELISAassaytodetectantibodiesagainstIBRV—DQusingexpressedgDproteinsDONGHua—xing，HoUXi—lin，XIEJin—xin，ZHANGPei—xin，LIUQiang，LIUPeng，WANGYan-tao(CollegeofAnimalScienceandTechnology，HeilongjiangAugust—FirstLandReclam

4、ationUniversity，Daqi：ng163319，China)Abstract：AnindirectELISAwasdevelopedtodetectantibodiesagainstIBRVusingrecombinantgDproteinofinfectiousbovinerhinotracheitisvirus(IBRV)．TheprokaryoticexpressionsystemofpET30a—gDexpressingtheIBRVrecombinantgDproteinswasused．Wester

5、nblotwasemployedtodetectthere—combinantproteins．Throughthematrixexperiments，theoptimalcoatingantigenconcentrationwas2．5t*g／mL，andtheoptima1serumdilutionwas1：200。an(itheoptimaldilutionofHRP—labeledrabbitanti—bovineIgGwas1：5000．IncomparisontotheVNTestandthewholeviru

6、sELISA，theagreementrateofgD—ELISAis87．5and92．5，respectively．The863serumsamplesfromHeilongjiangprovinceweredetectedbythisassay．Thepositiveratewas82．27％．ThisELISAcanbeusedforepidemiologicalsurveyforinfectiousbovinerhinotracheitjs．Keywords：IBRV；recombinantgDproteins；

7、indirectELISA；antibodydetectionC0rrespondingauthor：HoUXi—lin牛传染性鼻气管炎(infectiousbovinerhinotra—象。20世纪50年代在美国首次发现本病并分离到cheitis，IBR)是由牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)病毒。我国于20世纪70年代在进口牛群中发现该引起的牛的一种急性、热性、接触性传染病。该病被病。20世纪80年代分离到病毒。目前部分省市地世界动物卫生组织(OIE)列为B类传染病，也是我区的各种牛群中均有此病毒感染，且有逐渐上升的国进

8、出境动物和国际动物贸易中规定的重点检疫对趋势，给养牛业造成了严重危害口]。因此，加强IBR诊断技术的研究对预防和控制该病具有重要的意义。收稿日期：20091229IBRV属于牛疱疹病毒I型(bovineherpesvirus基金项目：人庆市科技局资助项目(SGG20060lO)type1，BHV一1)，