牛传染性鼻气管炎病gB蛋白的截短表达及间接ELISA方法的建立.pdf

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1、第37卷第2期中国预防兽医学报Vo1．37．N0．22015年2月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineFeb．2015doi：10．3969~．issn．1008-0589．2015．02．10牛传染性鼻气管炎病gB蛋白的截短表达及间接ELISA方法的建立曹种-，曹永生，宋林，高明春，彭统全，张树栋，王君伟(1．东北农业大学动物医学学院，黑龙江哈尔滨150030；2．黑龙江水产研究所，黑龙江哈尔滨150001)摘要：为建立检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)间接ELISA方法，

2、本研究根据GenBank登录的IBRV全基因组序列，设计引物扩增糖蛋白B(gB)基因编码第190~524氨基酸残基(aa)N基因，构建重组质粒pET-gB进行原核表达。SDSPAGE结果显示目的蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式表达，大小约为40ku。Westernblot鉴定表明目的蛋白具有良好的反应原性。以纯化的gB蛋白作为包被抗原建立了间接ELISA检测方法，该方法敏感性好，特异性强，与其他病原血清无交叉反应，其组内组间变异系数均低于l1％。与IDEXX公司的gB-ELISA试剂盒进行对比，阳性符合率为84-28％，阴性符合率为

3、85．71％。采用本研究建立的方法对黑龙江省10个农场的血清样品进行了IBR的流行性调查，阳性率最高为65．52％，最低为5．56％，平均阳性率为18．01％。本研究建立的ELISA方法为进出口检疫和该病防制工作提供一种可选方法。关键词：牛传染性鼻气管炎病毒；gB蛋白；原核表达；间接ELISA中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：1008—0589(2015)02—0123—05DevelopmentofanindirectELISAfordetectionofantibodiesagainstinfectiousb

4、ovinerhinotracheitisvirustruncatedglycoproteinBCAOChong，CAOYong—sheng2，SONGLin，GAOMing—chun，PENGTong—quan，ZHANGShu—dong，WANGJun—wei(1．CollegeofVeterinaryMedicine，NortheastAgriculturalUniversity，Harbin150030，China；2．HeilongjiangFisheriesResearchInstitute，Harbin150001，

5、China)Abstract：Inthisstudy，apairofprimersweredesignedtoamplifythegenefragmentencodingthesequenceofaal90一aa524ofglycoproteinB(gB)infectiousbovinerhinotracheitisvirusandtheamplifiedproductwasinsertedintopET一30avectortoconstructrecombinantplasmidofpET—gBandtransformedin

6、toE．coilRosetta．TheexpressionresultsshowedthatthetargetproteinwasexpressedmainlyinformofinclusionbodywithaMWof40ku．whichwasrecognizedbyIBRVpositiveserum．Inaddition，anindirectELISAwasdevelopedwiththetruncategBasacoatingantigenfordetectingantibodyagainstIBRV．Theassaywa

7、sspecifictodetectantibodyagainstIBRV，butnocrossreactionswithpositiveseratootherrelateddiseases，andthecoeficientofvariationwaslessthan11％．Furthermore．theassaywerecomparedwiththecommercialdetectionkitofIDEXXgB—ELISAandtheresultsshowedthatthepositiveandnegativecoinciden

8、cerateswere84．28％and85．71％，respectively．While，atotalof1，377bovineserafromdifferentregionsofHeilongjiangweredetectedbythisassayandth