牛传染性鼻气管炎和赤羽病基因芯片检测方法的建立和应用.pdf

《牛传染性鼻气管炎和赤羽病基因芯片检测方法的建立和应用.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第35卷第12期中国预防兽医学报VO1．35．NO．122013年12月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineDec．2013doi：10．3969~．issn．1008—0589．2013．12．07牛传染性鼻气管炎和赤羽病基因芯片检测方法的建立和应用陈圣军1r，孔繁德，徐淑菲，张吉红，唐泰山(1集美大学生物工程学院，福建厦门361021；2．厦门出入境检验检疫局，福建厦门361026；3．宁波出入境检验检疫局，浙江宁波315012；4．江苏出入境检验检疫局，江苏南京210001)摘要：为建立牛传染性

2、鼻气管炎病毒(IBRV)和赤羽病病毒(AKAV)~双重快速检测方法，本研究根据IBRVgB基因和AKAvs基因序列设计合成了2对特异引物和探针，建立了同时检测这两种病毒的基因芯片检测方法，即以合成探针的5’端添加polyT10尾并氨基化固定于经处理的玻璃基片表面作为捕捉序列，采用荧光素Cy3标记正向引物的5’端，对样品的PCR扩增产物进行检测，并通过试验确定其适宜杂交温度为38℃。该方法检测IBRV和AKAv重组质粒的灵敏度分别为3．6×10拷贝／25L和9．26x10拷贝／25L，同时通过对牛的腺病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛水泡性口炎病毒、口蹄疫病毒及

3、牛白血病病毒等的检测均无交叉反应，表明其特异性强。该检测方法的建立对于加强进出口牛的IBRV和AKAV检验检疫具有十分重要的意义。关键词：牛传染性鼻气管炎病毒；赤羽病病毒；寡核苷酸芯片；检测中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：1008．0589(2013)12—0980．05EstablishmentandprimaryapplicationofOIigOnucleOtidemicroarrayfordetectionofinfectiousbovinerhinotracheitisvirusandAkabanevirusCHENShen

4、g-jun，，KONGFan—de，XUShu—fei，ZHANGJi—hong3，TANGTai-shan(1．CollegeofBioengineering，JimeiUniversity，Xiamen361021，China；2．XiamenEntry-ExitInspectionandQuarantineBureauXiarnen361026，China；3．NingboEntry-ExitInspectionandQuarantineBureau，Ningbo315012，China；4．JiangsuEntry—ExitInspection

5、andQuarantineBureau，Nanjing210001，China)Abstract：Toestablisharapidduplexassayfordetectionofinfectiousbovinerhinotracheitisvirus(IBRV)andAkabanevirus(AKAV)，basedontwopairsofprimers(1abeledwithCy3at5’endofforwardprimers)andprobes(added10polyTwithanimationmodificationat5’end)design

6、atedaccordingtoIBRVgBSgeneandAKAVSgenesequencesinGenBank，thegenechipassaywasdevelopedbyspotingtheprobeoligonucleotidesontheglasssupportascapturesequencestospecificallydetectthePCRproductsforthe2kindsofvirus．Undertheoptimizedofhybridizationconditionof38℃．thedetectionlimitsofthege

7、nechipwas3．6×10copies／25IxLfor1BRVand9．26x10copies／25IxLforAKAV，respectively，andnocross．reactionwithotherbovinevirus．Thechipwasprovedtobeusefulforlaboratoryrapiddetectionsandimport—exportquarantinesofIBRVandAKAVinfectedincatle．Keywords：IBRV；AKAV；oligonucleotidemicroarray；detecti

8、on木Correspondingauthor收稿日期2013—04．28基金项目福建省自然科学