牛传染性鼻气管炎病毒gE基因SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立.pdf

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1、第33卷第3期内蒙古农业大学学报Vo1．33No．32012年5月May．2012JOUlTlaloflnnerMongoliaAgriculturalUniversity牛传染性鼻气管炎病毒gE基因SYBRGreenI荧光定量PCR检测方法的建立孙志明，用伟光，陈玉惠，高晶，希尼尼根，关平原(1．内蒙古农业大学兽医学院，呼和浩特010018；2．农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室，呼和浩特010018)摘要：目的建立1种特异、灵敏、高效的检测1BRVgE基因的荧光定量PCR方法，并为鉴别IBRV

2、野毒株和gE基因缺失疫苗株的感染提供技术手段。方法根据IBRVgE基因保守序列，设计一对引物，建立荧光定量PCR反应体系和反应条件，利用10倍梯度稀释病毒DNA进行荧光定量PCR扩增，以检测本试验建立的荧光定量PCR的灵敏度。用IBRV、牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒、MDBK细胞、牛血清等进行特异性检测。用模拟样品进行临床应用试验。结果本试验建立的荧光定量PCR方法，其灵敏度约为70DNA拷贝／L，除了IBRV从其他病毒和样品未扩增出曲线，临床模拟样品检测结果为0．03TCID50。结论本试验建立的

3、荧光定量PCR方法具有特异性强、灵敏性高、快速，低污染等优点，因此临床上可以用于IBRV的检测和病原学调查。关键词：牛传染性鼻气管炎病毒；荧光定量PCR；灵敏性；特异性中图分类号：$858．235文献标识码：A文章编号：1009—3575(2012)03—0005—04DEVELOPMENTOFSYBRGREENREAL—TIMEPCRFORQUANTlFYINGINFECTIOUSBOVINERHlNOTRACHEITlSVIRUSgEGENESUNZhi—rning，ZIIOUWci—guang

4、，cItENGYu—hui，GAOJing，Xininigen(CollegeofVeterinaryMedicine，InnerMongoliaAgriculturalUniversity，KeylaboratoryofClinicalDiagnosisandTreatmentTechnologyinAnimalDisease，MinistryofAgriculture，ttohhot，010018，China)Abstract：PurposeToestablishtheReal—timePCRf

5、ordetectionofIBRVgEgene，andtodistinguishbetweentheIBRVwildstrainandgEdeletionIBRVvaccinestrain．MethodsApairofprimerweredesignedbasedontheIBRVgEgeneconservativeregion．Thereal—timePCRmethodwasdevelopedbytheoptimizationofthereactionconditions．Theviral10一f

6、oldsefialdilutionDNAsamplesandIBRV．BVDV，bovinerotavirus，MDBkcellsandbovineselqlmwereusedtotestthesensitivityandspeeificityofthemethod．Re．suitThereal—timePCRmethodhadbeendeveloped．anditcoulddetect70eopies／~L．Theresuhoftheclinicalsimulationdetectionwas0．

7、03TCID50．Conelusion：Thismethodcharacterizedbyhighspecific，sensitive，shorttestingtimeandlowerpollution．Incon．clusion，thismethodcouldbeusedforrapidquantitativedetectionofIBRVinclinicalsamples．Keywords：BovineRhinotracheitisvirus：Real—timePCR：sensitivity：s

8、pecificity牛传染性鼻气管炎病毒(InfectiousBovineRhi—炎和生殖道黏膜病变-1J。本病于1950年首次发现notracheitisVirus，IBRV)又被称为牛疱疹病毒1型、于美国，目前广泛流传于世界各地。我国大部分地坏死性鼻炎病毒和传染性脓包外阴阴道炎病毒。该区都有不同程度该病毒的感染。对牛的育肥、繁殖病毒属于疱疹病毒科的甲疱疹病毒亚科，具有典型力、产奶量等都有较大影响，给我国养牛业造成很大的泛嗜性，能侵袭多种组织器官，引起多种临床症的经