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《牛传染性鼻气管炎和赤羽病基因芯片检测方法的建立和应用.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第35卷第12期中国预防兽医学报VO1.35.NO.122013年12月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineDec.2013doi:10.3969~.issn.1008—0589.2013.12.07牛传染性鼻气管炎和赤羽病基因芯片检测方法的建立和应用陈圣军1r,孔繁德,徐淑菲,张吉红,唐泰山(1集美大学生物工程学院,福建厦门361021;2.厦门出入境检验检疫局,福建厦门361026;3.宁波出入境检验检疫局,浙江宁波315012;4.江苏出入境检验检疫局,江苏南京210001)摘要:为建立牛传染性
2、鼻气管炎病毒(IBRV)和赤羽病病毒(AKAV)~双重快速检测方法,本研究根据IBRVgB基因和AKAvs基因序列设计合成了2对特异引物和探针,建立了同时检测这两种病毒的基因芯片检测方法,即以合成探针的5’端添加polyT10尾并氨基化固定于经处理的玻璃基片表面作为捕捉序列,采用荧光素Cy3标记正向引物的5’端,对样品的PCR扩增产物进行检测,并通过试验确定其适宜杂交温度为38℃。该方法检测IBRV和AKAv重组质粒的灵敏度分别为3.6×10拷贝/25L和9.26x10拷贝/25L,同时通过对牛的腺病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛水泡性口炎病毒、口蹄疫病毒及
3、牛白血病病毒等的检测均无交叉反应,表明其特异性强。该检测方法的建立对于加强进出口牛的IBRV和AKAV检验检疫具有十分重要的意义。关键词:牛传染性鼻气管炎病毒;赤羽病病毒;寡核苷酸芯片;检测中图分类号:$852.65文献标识码:A文章编号:1008.0589(2013)12—0980.05EstablishmentandprimaryapplicationofOIigOnucleOtidemicroarrayfordetectionofinfectiousbovinerhinotracheitisvirusandAkabanevirusCHENShen
4、g-jun,,KONGFan—de,XUShu—fei,ZHANGJi—hong3,TANGTai-shan(1.CollegeofBioengineering,JimeiUniversity,Xiamen361021,China;2.XiamenEntry-ExitInspectionandQuarantineBureauXiarnen361026,China;3.NingboEntry-ExitInspectionandQuarantineBureau,Ningbo315012,China;4.JiangsuEntry—ExitInspection
5、andQuarantineBureau,Nanjing210001,China)Abstract:Toestablisharapidduplexassayfordetectionofinfectiousbovinerhinotracheitisvirus(IBRV)andAkabanevirus(AKAV),basedontwopairsofprimers(1abeledwithCy3at5’endofforwardprimers)andprobes(added10polyTwithanimationmodificationat5’end)design
6、atedaccordingtoIBRVgBSgeneandAKAVSgenesequencesinGenBank,thegenechipassaywasdevelopedbyspotingtheprobeoligonucleotidesontheglasssupportascapturesequencestospecificallydetectthePCRproductsforthe2kindsofvirus.Undertheoptimizedofhybridizationconditionof38℃.thedetectionlimitsofthege
7、nechipwas3.6×10copies/25IxLfor1BRVand9.26x10copies/25IxLforAKAV,respectively,andnocross.reactionwithotherbovinevirus.Thechipwasprovedtobeusefulforlaboratoryrapiddetectionsandimport—exportquarantinesofIBRVandAKAVinfectedincatle.Keywords:IBRV;AKAV;oligonucleotidemicroarray;detecti
8、on木Correspondingauthor收稿日期2013—04.28基金项目福建省自然科学
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