水疱性口炎病毒两血清型G蛋白的截短表达和间接ELISA方法的建立-论文.pdf

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1、中园兽医杂志2014年(第5O卷)第6期69水疱性口炎病毒两血清型G蛋白的截短表达和间接ELISA方法的建立臧京帅，高志强，张乐萃，张鹤晓(1．青岛农业大学动物科技学院，山东青岛266109；2．北京出入境检验检疫局，北京朝阳100026)摘要：根据水疱性口炎病毒印第安那型(IND型)和新泽西型(NJ型)G蛋白抗原表位分布图，在表达抗原表位较密集的基因区域设计引物，采用RT-PCR方法分别扩增水泡性日炎病毒IND型657bpG蛋白基因片段和NJ型666bpG蛋白基因片段，并将其克隆到pET一32a表达载体。将重组质粒转化宿主菌Rosetta，经I。0mmol／

2、LIPTG诱导，外源基因获高效表达。通过Western—blot以及ELISA试验证明截短表达的2个血清型的重组G蛋白与标准阳性血清发生反应。将2个血清型的重组G蛋白等量混合作为检测抗原包被酶标板，建立了可检测IND型和NJ型水泡性口炎病毒抗体的间接ELISA~。关键词：水疱性口炎病毒；G蛋白基因；重组表达；间接ELIsA中图分类号：$852．65文献标志码：A文章编号：0529—6005(2014)06—0069—04EstablishmentofanIndirectELISAforTestingAntibodiesAgainsttheTwoTYPesofV

3、esicularStomatitisVirusBasedonTruncatedGProteinExpression÷ZANGJing—shuai，GAOZhi—qiang2，ZHANGLe-euit，ZHANGHe-xiao。(1．AnimalScienceandTechnologyCollege，QingdaoAgriculluraJUniversity，Qingdao266109，Chil2．BeijingEntry-exitInspectionandQuarantineBureau,tBeijing100026,China)Abstract：Thepri

4、mersattheepitopedenseregionofGprotein(Gpr)ofvesiculaxstomatitisvirusIndiana(IND)type萼ndNewJerseytype(NJ)weredesigned，AfteranalyzingtheantigenepitopesofINDandNJVSVGpr,thetruncatedGprgenefragmentsof657bp(IND)and666bp(NJ)wereamplifiedbyRT--PCR,andwastheninsertedintopET-32aexpressionvec

5、tor．Toobtainthefunc—tionaltruncatedGprotein，therecombinantplasmidsweretransformedinto。coliRosetta,andinducedby1．0mmol／LIPTGindnc—tion．TheresultsofSDSpageshowedthattheexogenoussenewashighlyexpressed．TheWestern-blotWascarriedo试toconfirmthattheshortenedrecombinantexpressionproteinGprco

6、uldreactwiththestandard．positiveserum．Furthermore,trecombinant加m阳扣edGproteinoftwoserotypeswereequallymixedtocoatEHSAplates,andindirectELISAmethodwas喊ablishedt醯testingantibod-iesagainstVSVofINDandNJtype．KeywordS-"VesicularStomatitisVirus；ProteinGgene；Recombinantexpression；IndirectELI

7、SACorrespondingauthors：Z日ANGLe—cuiZHANGHe-xiao水疱性口炎(Vesicularstomatitis，VS)是由水疱分成两个血清型，即新泽西型(VSV—NJ)和印第安性口炎病毒(Vesicularstomatitisvims，vsv)引起的那型(VSV—IND)；但这2个血清型的病毒在结构基动物病毒性传染病，VSV可感染马及其他多种动因组成、转录调控和病毒蛋白等方面均相同[21。物，其中马的易感性最强。其临床特征为短期发由于我国还没有该病发生和流行的报道，故将其热，口腔黏膜、乳头上皮、趾间及蹄冠部出现丘疹列为外来病，在

8、进出境动物检疫对象中被列为二和水疱⋯。