猪圆环病毒2型cap蛋白原核表达及间接elisa方法的建立

《猪圆环病毒2型cap蛋白原核表达及间接elisa方法的建立》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、■，—棘驛薛筹．巧渗辆雜義麵游韦吁１’＇Ｓ：１５５１８＼＼；‘．，．巧＇＇．；－；．．：户：．．Ｖ＊端藏诗遂从Ｖ擎離位讀心翻：＾Ｖ巧釋伊！鳴謙察瓣猪園巧病毒２型Ｃａ蛋白原核表达及间接ｒ挣护专ｐ’？＝■‘．八，＇．．ｔ．．Ｖ！Ｖ，，．去扛．．５，主巧、，；＾，扣．．、轉豕Ｋ式化ＩＳＡ方法的建立备矿；术皆＃；？辦鑛辨；吃：冶％為屬处索耗－．龄事膨ｆ鑛％杨堇整；＾．：賴觀巧旁常験暫．Ｐ？＇？、＾＾．．：；指导教师姓義Ｖ田丽红副教成；Ｘ．授东北林业犬学：來足

2、公、．＇申请学位级别＇：Ｖ学科专业；生珪学味背苗齋；户姜乂ｆ３舞＂．＇：论文答辩曰期：期５？谦文提交曰期術辜細部帝：吉户局鸿巧齡巧’处；授予学位单位：东北林业大学授予学位日期：２０１５单６点感捧巧皆ｉ讀－＇：ｖ：Ｉｔｖｖ＃：＇子答辨委员会主席？：贿娟教授‘，．，请和Ｘ於：轉ｊ专带扛＇护’參论．、文评阅人；、ｖ：是边課戸每捧；棘靜‘‘‘．：Ｖ，？／．＾．．．．私齋、猜＞＾，忠果．，＊．ｙ＾靖如巧—＞中、據矿．．＾：Ｖ接賴礎娜ｉ＂辟１ｆ节却巧紙喔如將寺乂學Ｉ互＇：

3、瓣Ｉ翻謙阔Ｉ，補参謂，．．ｍ．－；点Ｖ纖；馨聲華養学校代码１０２２５：学号：Ｓ１５５１８学化冷文猪圆环病毒２型Ｃａｐ蛋白原核表达及间接ＥＬＩＳ乂方法的建立杨堇聖指导教师姓名：田丽红副教授东北林业大学申请学位级别：：硕±学科专业生理学论文提交日期：２０１５年４月论文答辩日期：２０１５年６月：２０１５授予学位单位：东北林业大学授予学位日期年６月答辩委员会主席：白秀娟教授论文评阅人：、＃４《并：乂争ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＣｏｄｅ：１０２２５

4、ＲｅｇｉｓｔｅｒＣｏｄｅ：Ｓ１５５１８ＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅＤｅｒｅｅｏｆＭａｓｔｅｒｇＰｒｏｋａｒｏｔｉｃＥｘｒｅｓｓｉｏｎｏｆＰＣＶ２ＣａｒｏｔｅｉｎａｎｄｙｐｐｐｔｈｅｄｅｖｅｌｏｍｅｎｔａｎｉｎｄｉｒｅｃｔＥＬＩＳＡｐＣａｎｄｉｄａｔｅ：ＹａｎＹｉｎｉｎｇｇｙｇＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：ＴｉａｎＬ化ｏｎｇＡｓｓｏｃｉａ化Ｓｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：ＡｃａｄｅｍｉｃＤｅｒｅｅＡｌｉｅｄｆｏｒ：ＭａｓｔｅｒｇｐｐＳｐｅｃ

5、ｉａｌｉｔｙ：ＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙＤａｔ：ｅｏｆＯｒａｌＥｘａｍｍａｔｉｏｎ：Ｊｕｎｅ２０１５，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔ：ＮｏｒｔｈｅａｓｔＦｏｒｅｓｔｒＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｙｙ摘要摘要猪圆环病毒２型（Ｐｏｒｃｉｎｅｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓｔｅ２ＰＣＶ２）被公认为在世界范围养猪业中造ｙｐ，一成严重经济影响的最重要的病毒之。由于病毒、宿主的免疫力、混合感染情况和其他（ｏｒｃｉｎｅｃｉｖｉｍ环境特征的差异，ＰＣＶ２能引起不同的疾病，统称为圆环病毒病ｐｒｃｏｓｄ一一ｉｓｅａｓｅ

6、ｓＰＣＶＤｓ）。我国是ＰＣＶＤｓ在我国直呈上升趋势，给我国的养，个养猪大国，猪业造成了巨大的经济损失。血清抗体的检测常被用来分析ＰＣＶ２的感染情况Ｗ及评价疫苗的免疫效果。ＥＬＩＳＡ因其敏感、特异、检测快速、简便等优点，而被广泛应用。然而研究表明，国内检测ＰＣＶ２抗体的ＥＬＩＳＡ试剂盒普遍存在敏感性偏低的问题，而进口试一。，、剂盒因其价格昂贵，难于普及应用因此建立种快速简便、敏感、特异的诊断方法对于ＰＣＶ２的预防和控制具有重要意义。－－本研究利用ＰＣＲ方法扩增ＰＣＶ２０ＲＦ２全长基因，构

7、建原核表达載体ｐＥＴ３０ａ’Ｃｃｏ－ａｐ，转化￡；／！ＢＬ２１ＤＥ３。在ＳＤＳＰＡＧＥ分析基础上，结合ＩｍａｅＪ和Ｇｒａｈａｄ（）ｇｐｐｒｉｓｍ５０软Ｃａ，０〇ＩＰＴＧｐ．件的分化对影响重组ｐ蛋白表运的诱导温度诱导起始６〇〇，￣浓度及诱导时间等因素进行了优化：．０１．，确定最佳表达条件为当菌体浓度达到１５‘时，加入终浓度为０．２ｍＭ的ＩＰＴＧ，巧Ｃ恒温摇床１７５ｒｐｍ振荡培养５ｈ。为得到高纯度的重组Ｃａｐ蛋白，对重沮Ｃａｐ蛋白纯化条件进行了探索，确定蛋白洗緣液中咪性浓度

8、为１００ｉｎＭ，蛋白洗脱液中眯嗤浓度为３００ｍＭ。纯化后的蛋白进斤Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定，－重组Ｃａｐ蛋白只与ＰＣＶ２标准阳性血清反应，与ＢＬ２１ＤＥ巧阳性血清和ＥＴ３０ａ／（ｐ化２１（ＤＥ３）阳性血清均不发生反应，表明纯化的重姐Ｃａｐ蛋白具有良好的特异性和反应原性。纯化的重沮Ｃａ－蛋白为包被抗原，２ＣａＥＬＩＳＡ检测ｐ，优化