山羊关节炎-脑炎病毒P28蛋白的表达与间接ELISA方法的建立-论文.pdf

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1、第36卷第7期中国预防兽医学报Vo1．36．NO．72014年7月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineJu1．2014doi：10．3969~．issn．1008—0589．2014．07．13山羊关节炎一脑炎病毒P28蛋白的表达与间接ELISA方法的建立刘慧敏，-，相文华，李一经(1．东北农业大学动物医学院，黑龙江哈尔滨150030；2．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨维科生物技术开发公司，黑龙江哈尔滨150001)摘要：为建立检测山羊关节炎

2、一脑炎病毒(CAEV)．~-清抗体的间接ELISA方法，本研究将原核表达并纯化的CAEVP28蛋白作为检测抗原，采用方阵法确定包被抗原和待检血清的最佳工作浓度，经过对反应条件的优化建立了CAEV间接ELISA抗体检测方法。该方法仅对CAEV血清检测为阳性，对口蹄疫、山羊痘和蓝舌病病毒的阳性血清检测结果均为阴性；敏感性试验表明标准阳性血清1：3200倍稀释时，检测结果仍为阳性。该方法的批内和批间重复试验的变异系数分别小于7％和10％。对人工感染山羊血清进行检测，该ELISA方法最早可以在第2周检出抗体

3、，琼脂凝集免疫扩散~(AGID)最早可以在第4周检出抗体；与AGID试验方法相比，ELISA检出率提高27．2％。结果表明，本研究所建立的间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和可重复性，为该病的诊断和监测提供了有效的技术手段。关键词：山羊关节炎-脑炎病毒；p28基因；间接ELISA中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：1008．0589(2014)07．0555．04EstablishmentoftheindirectELISAf0rdetectionofantibodyagain

4、stcaprinearthritisencephalitisvirusLIUHui—min，XIANGWen—hua2，LIYi-jing(1．CollegeofVeterinaryMedicine，NortheastAgriculturalUniversity，Harbin150030，China；2．HarbinWeikeBiotechnologyDevelopmentCo．，Ltd．，HarbinVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgric

5、ulturalSciences，Harbin150001，China)Abstract：Caprinearthritisencephalitis(CAE)isachronicdebilitatingdiseaseofgoatscausedbyalentivirusresponsibleforeconomiclossesasaresultofadropinmilkproductionandweightloss．ToestablishtheserumdiagnosismethodofCAE，anindi

6、rectELISAwasdevelopedforthedetectionofCAEvirus(CAEV)antibodywiththeP28proteinofCAEVascoatingantigenexpressedinE．coli．Undertheoptimizedreactionconditions，theassaywasabletospecificallydetectthepositiveserulnofCAEVwiththedetectionlimitof1：3，200fortheCAEVs

7、tandardpositiveserum，butnocross—reactionswerefoundagainstthepositiveseraofothervirus，includingfootandmouthdisease，bluetonguevirusandgoatpoxvirus．Thecoefficientsofvariationforintra—andinter-assaywerelowerthan7％and10％．respectively．TheELISAwascapabletodet

8、ectpositivelyfortheexperimentallyinfectedgoatsasearlyat14dayspostinoculation，comparingwith28daysdetectedbyagargelimmunodifusiontest．TheestablishedELISAisarapid，sensitiveandspecificfordetectingantibodiesagainstCAEVandhasapotentialtocompl