尼帕病毒G和F蛋白单克隆抗体的制备与鉴定.pdf

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1、第33卷第11期中国预防兽医学报Vo1．33，No．112011年11月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineNOV．2011doi：10．3969~．issn．1008—0589．2011．11．16尼帕病毒G和F蛋白单克隆抗体的制备与鉴定苏华，温志远，吴超，王喜军，胡森，陈伟业，葛金英，步志高(oe国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／农业部兽医公共卫生重点开放实验室，黑龙江哈尔滨150001)摘要：为制备抗尼帕病毒(NiV)G和F蛋白的单克隆抗体(MAb1，本研究以

2、表达NiVG和F蛋白的真核重纽表达质粒pCAGG—NiVG和pCAGG．NiVF分别免疫BALB／c小鼠，采用常规技术制备杂交瘤细胞；以表达G和F蛋白的重组牛痘病毒(rWR-NiVG、rWR—NiVF)分别感染BHK细胞，通过间接免疫荧光(IFA)筛选阳性克隆，分别得到一株抗G和抗F蛋白的MAb，命名为G3E9和F2G1。两株MAb均为IgM亚型／K链。IFA检测G3E9和F2G1杂交瘤细胞诱导的小鼠腹水中IgM抗体效价均为1：1024。细胞融合抑制试验表明两株MAb均具有抑制NiVG和F蛋白共表达诱导细胞融合的功能；并且采用表达NiVG

3、和F蛋白的水泡性口炎伪型病毒进行的中和试验表明两株MAb具有一定的中和活性。关键词：尼帕病毒；G和F蛋白；细胞融合；单克隆抗体中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：1008．0589(2011)l1—0898．04PreparationandidentificationofthemonoclonalantibodiesagainstGorFproteinofNipahvirusSUHua，WENZhi—yuan，WUChao，WANGXi-jun，HUSen，CHENWei—ye，GEJin—ying，BUZhi-gao(Ke

4、yLaboratoryofVeterinaryPublicHealthofMinistryofAgricultural，StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology，HarbinVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Harbin150001，China)Abstract：Topreparethemonoclonalantibody(MAb)againstGorFproteinofNipahvirus(NiV

5、)，hybridomacelllineswereproducedbyfusinigSP2／0cellswithspleencellsfrommouseimmunizedwithpCAGG—NiVGorpCAGG—NiVFexpressingGorFproteinofNiV，respectively．Twohybfidomacelllines，designedG3E9andF2G1wereindentifiedbyindirectimmunofluorescenceassay，whichwerestablelysecretingMAbsag

6、ainstGorFprotein．ThetwoMAbswereIgMsubtypewithkappalightchain．BothMAbswereabletoreducesyncytiumformationofBHKcellsthatinducedbytheCO—expressionofGandFproteinofNiV．Futhermore，theMAbsalsohadtheabilitytoneutralizethepsudotypedvesicularstomatitisvirusexpressingbothGandFprotein

7、sofNiV．Keywords：Nipahvirus；GandFproteins；syncytium；monoclonalantibodies尼帕病毒脑炎是一种高度烈性人畜共患传染中旬于马来西亚首次爆发，造成105名患者死亡，病，其病原尼帕病毒(Nipahvirus，NiV)属于副粘病病死率为40％。为了控制疾病的蔓延，一百多万头毒科，亨尼帕病毒属⋯。NiV宿主范围广泛，其中猪被扑杀，占该国养猪量的40％。此后，该病又在猪是重要的易感动物。目前认为NiV可能的中间宿新加坡、印度、孟加拉国爆发，给这些国家的畜牧主为果蝠【2]。该病于1998

8、年9月下旬至1999年6月业发展和人民健康造成了严重危害。*Correspondingauthor收稿日期：2011-09—16基金项目：公益性行业(农业)科研专项(200903037)作者简