西尼罗病毒NSl蛋白特异性单克隆抗体的制备与鉴定.pdf

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1、里健男生西尼罗病毒NS1蛋白特异性单克隆抗体的制备与鉴定第6期529doi：10．3969／j．issn．1000—484X．2011．06．012·免疫学技术与方法·西尼罗病毒NS1蛋白特异性单克隆抗体的制备与鉴定①马健男杨涛徐青元孙恩成林燕刘霓红杨银辉②李文京⑧步志高吴东来(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室，哈尔滨150001)中国图书分类号R392．12文献标识码A文章编号1000-484X(2011)06-0529．04[摘要]目的：制备针对西尼罗病毒NS1蛋白的特异性

2、单克隆抗体。方法：以原核表达的重组NSI蛋白为免疫原，免疫BALB／c小鼠并通过常规杂交瘤技术将免疫后小鼠脾细胞与SP2／0细胞进行融合。以真核表达的重组NS1蛋白为检测用抗原，建立间接ELISA检测方法筛选分泌NS1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。并利用Westernblot和IFA试验对所获得的单克隆抗体进行鉴定。结果：共获得了2株稳定分泌NS1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为WN一1C10和WN一3D10，其亚类鉴定分别属于IgG2和IgGI。这2株单克隆抗体均能与西尼罗病毒NS1蛋白和病毒抗原发生特异性反应，而与日本脑炎

3、病毒无交叉反应。结论：本实验成功制备出针对西尼罗病毒NSI蛋白的特异性单克隆抗体，为我国建立西尼罗病毒与日本脑炎病毒的血清学鉴别诊断方法奠定了基础。[关键词]西尼罗病毒；NS1蛋白；单克隆抗体PreparationandcharacterizationofmonoclonalantibodiesagainstNS1proteinofWestNilevirusMAJian-Nan，YANGToo，XU憎n，SUNEn-一Cheng，L，ⅣYan，Ni—Hong，YANGYin-Hui，Wen-Jing，BUZhi—C,ao，WUDon

4、g-Lai．KeyLaboratoryofVeterinaryPublicHealth，MinistryofAgriculture，State研LaboratoryofVeterinaryBiotechnology，HarbinVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Harbin15(／101，ChinalAbstractjObjective：Topreparemonoclonalantikodies(McAbs)againstNS1prote

5、inofWestNilevirus(WNV—NS1)．Methods：BALB／cmicewereimmunizedintraperitoneallywiththep~SfiedNS1proteinexpressedbyprokaryotieexpressionsystem．ThenthespleeneeHsofimmunizedmousewerefusedwithSP2／0myelomacellsbythePEGregent．Meanwhile，anindirectELISAusingthepurifiedNSIproteinde

6、—rivedfromeukaryoticexpressionsystemasantigenWasdevelopedtoscreenantib~My—producinghybridomas．WesternblotandIFAwereappliedtocharacterizetheMcAbs．Results：TwohybridomacellstrainssecretingMeAbsagainstWNV—NS1protein．designatedasWN一1C10andWN一3010，wereobtaine~t．Conclusion：Th

7、eresultsofWesternblotandIFAindicatethatthesetwoMcAbsarespecificf0rWNV—NS1protein．anddon’tcross—reactwithJapaneseencephalitisvires(JEV)，SOtheyarehelpfultodevelopdifferentialdiagnosisbetweenWNVandJEV．[Keywords]WestNilevirus；NS1protein；Monoch)nalantitxxty西尼罗热(WestNileFeve

8、r，WNF)是由西尼罗病传染病llJ。20世纪50年代的埃及和以色列、60年毒(WestNilevirus，wNV)引起的急性人畜共患虫媒代的法国以及70年代的南非都有过该疾病的报道，但直到1996年罗马尼亚的WNF爆发，该疾病才真①