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时间:2020-05-20
《鼠疫耶尔森氏菌Pla蛋白单克隆抗体的制备与鉴定.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、ISSNIO07—8738细胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolI—m—ml望olj(985·论著·文章编号:1007—8738(2011)09—0985一O4鼠疫耶尔森氏茵Pla蛋白单克隆抗体的制备与鉴定杜春红,王鹏,张建中,唐雪,宋志忠(云南省地方病防治所,云南大理671000;中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,北京102206)体经尿素反复洗涤纯化后免疫BALB/c小鼠,取血清抗体效Preparationandidentificationofmono-价高的小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,以表clonalant
2、ibodiesagainstPlaproteinof达Pla、表达GST、天然提取Pla3种蛋白为抗原物,采用间接YersiniapestisELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,并结合Westernblot对所获取mAb的特异性进行鉴定。结果:经间接ELISA筛选,获得3DUChun—hong,WANGPeng,ZHANGJian一。,株能稳定分泌抗天然Pla蛋白mAb的杂交瘤细胞株,命名为15B8、14H4、19A4,亚类测定分别为IgG2a和IgG1,轻链均TANGXue,SONGZhi-zhong为K链;腹水经间接ELISA法检测效价可达1
3、:10。;WesternYunnanInstituteforEndemicDiseasesControlandPrevention,blot实验证实该3株mAb能特异性识别天然Pla蛋白。结论:Dali671000;NationalInstituteforCommunicableDiseaseCon-成功获得了抗鼠疫耶尔森氏菌天然Pla抗原的特异性mAb,trolandPreventionChineseCenterforDiseaseControlandPreven.为进一步研究Pla蛋白及研发诊断试剂奠定了基础。tion,Beijing10
4、2206,China[关键词]鼠疫耶尔森氏菌;Pla蛋白;单克隆抗体[Abstract]A蹦:Topreparethemonoclonalantibodyof[中图分类号]R392.11[文献标识码]APlawithrecombinantPla(rPla)byhybridomacelltechnolo-gY,whichwilllaythefoundationforrelatedresearchwork.鼠疫(Plague)是一种由鼠疫耶尔森氏菌(YersiniaMETHODS:PurifiedrPlawascollectedbywashing
5、repeat—pestis)引起的自然疫源性疾病,是一种严重危害人类edlywithurea.andBALB/cmicewereimmunizedbyl}1em.文明和社会经济发展的烈性传染病,其传播速度快、HybridomacellswereachievedbySp2/0cellfusionwith病死率高,被列为我国甲类传染病。对其作出快速、mousespleencellsfrOmsuccessfullyimmunizedmice.准确的诊断是鼠疫预防控制的关键。长期以来,以MonoclonaIantibodywasscreenedbyi
6、ndirectELISAand鼠疫菌的荚膜抗原即F1抗原及其抗体为基础建立的WesternblotswithrPla,naturaIcrudePlaandGSTrespec-免疫学诊断技术¨I2,在鼠疫防治工作中发挥了极tively.RESULTS:Threestrainsofhybridomacels(named其重要的作用。但F1抗原缺失菌株的存在、28~(2时15B8,14H4and19A4respectively)whichsecretedstably的不表达或微量表达等原因J,使以F1抗原为惟一themonoclonalantibo
7、dyofPlawereobtained.Theirsub-classeswereIgG2aandIgG1inheavychainsandKchains诊断靶点的诊断方法存在有漏诊的可能。因此构建inlightchains.TheELISAtitersofasciteswere10。respec-除F1抗原外以鼠疫菌其他特异性抗原为基础的免疫tively.ThreeofmonoclonaIantibodycanreactwithnatural学诊断方法十分重要。crudePlatestedbywesternblots.CONCLUSION:Mo
8、ne-由鼠疫菌9500bp质粒(pPCP1)编码的纤溶酶clonaIantibodyofnaturaJPlaofYersiniapestiswereSUC.原激活因
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