抗猪流行性腹泻病毒N蛋白单克隆抗体的制备与鉴定.pdf

《抗猪流行性腹泻病毒N蛋白单克隆抗体的制备与鉴定.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、浙江农业学报ActaAgriculturaeZhejiangensls，2015，27(6)：950—954http：／／www．zjnyxb．ca刘苏君，段松焕，胡景炎，等．抗猪流行性腹泻病毒N蛋白单克隆抗体的制备与鉴定[J]．浙江农业学报，2015，27(6)：950—954．DOI：10．3969／j．issn．1004—1524．2015．06．09抗猪流行-陛腹泻病毒N蛋白单克隆抗体的制备与鉴定刘苏君，段松焕，胡景炎，金俊杰，涂宜强，白宇(温州科技职业学院，浙江温州325006)摘要：为了制备猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白的单克隆抗体(Mab)，以原核表达的

2、融合蛋白GST—N为免疫原，免疫7周龄雌性BALB／c小鼠，利用重组蛋白His．N和Vero细胞培养病毒液作为检测筛选抗原，采用淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。结果表明：获得3株稳定分泌抗体的阳性杂交瘤细胞株(5B2，3H1和4H5)，单抗亚型鉴定均为IgG1，轻链均为Kappa链。Westernblot和间接免疫荧光试验结果表明，Mab能够识别重组N蛋白和PEDV。制备获得3株稳定性好、特异性强的Mab，可为今后建立检测猪流行性腹泻特异性诊断方法和研究PEDV核衣壳蛋白功能奠定基础。关键词：猪流行性腹泻病毒；N蛋白；单克隆抗体中图分类号：S858．28文献标志码：A文

3、章编号：1004—1524(2015)06-0950-05PreparationandidentificationofmonoclonalantibodiesagainstthenucleocapsidproteinofporcineepidemicdiarrheavirusLIUSu-jun，DUANSong—huan，HUJing-yan，JINJunkie，TuYi—qiang，BA1Yu(WenzhouVocationalCollegeofScienceandTechnology，Wenzhou325006，China)Abstract：Inordertoprep

4、arethemonoclonalantibodiesagainstporcineepidemicdiarrheavirus(PEDV)Nprotein，BALB／cmicewereimmunizedwithpurifiedrecombinantNproteinemulsifiedinFreund’Sadjuvant．Themonoclonalantibodies(Mabs)werepreparedbyfusingmousemylomacells(SP2／O)withthespleencellsfromBALB／cmiceimmunizedwiththepurifiedre

5、combinantNprotein．ThreehybridomacelllinessecretingMabswerescreenedbyin—directenzyme—linkedimmunosorbentassay(ELISA)andnamedas5B2，3H1and4H5，respectively．TheresultsofWesternblotandimmunofluorescenceassayanalysesshowedthatthethreeMabscouldreactspecificallywiththere—combinantNproteinorPEDV．Th

6、eisotypesofthreeMabsbelongtoIgG1subtypewithKappachain．ItwasindicatedthattheseMabsmaybeusefulfordevelopingthediagnosismethodsandinvestigatingthepathogenicityofPEDV．Keywords：porcineepidemicdiarrheavirus(PEDV)；Nprotein；monoclonalantibody猪流行性腹泻(porcineepidemicdiarrhea，为主要特征的高度接触性肠道传染病⋯。1978年P

7、ED)是由猪流行性腹泻病毒(porcineepidemic在英国和比利时首次报道，随后蔓延至欧洲和亚diarrheavirus，PEDV)引起的以腹泻、呕吐、脱水洲部分国家。20世纪80年代初，我国陆续发生收稿日期：2015~1基金项目：浙江省大学生科技创新活动计划暨新苗人才计划项目(2014R454001)；浙江省公益性技术研究农业项目(2014C32046)作者简介：刘苏君(1993一)，男，浙江丽水人，畜牧兽医专业高职学生。E-mail：793786303@qq．tom通讯作者，白宇，E—mail：baiyul06@16