青蒿琥酯对高糖诱导的肾小管上皮细胞TLR4、NF-κB表达及合成的影响.pdf

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1、·904·安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2015Jul；50(7)青蒿琥酯对高糖诱导的肾小管上皮细胞TLR4、NF-KB表达及合成的影响蒋姗姗，龙艳，苏珂，聂寒，杨帆，郑天鹏，莫如芬摘要目的探讨青蒿琥酯(Art)对高糖诱导下的大鼠肾导炎症反应的发生j，同时炎症因子又可进一步激小管上皮细胞(NRK-52E)Toll样受体4(TLR4)、核转录因活NF．KB，从而诱发炎症信号不断放大』。青蒿琥子一KB(NF—KB)表达及合成的影响。方法体外培养NRK一酯(artesunate，Art)是我国传统中药青蒿素

2、的一种水52E细胞，分为6组：正常对照组、高糖组、Art小剂量组、Art溶性衍生物，是治疗疟疾的经典药物J，研究显中剂量组、Art高剂量组、依那普利组。培养48h后收集各示其对多种炎症性病理模型如佐剂性关节炎大鼠、组细胞，采用逆转录一聚合酶链反应(RT—PCR)法检测细胞哮喘大鼠具有明显的抗炎和免疫调节作用，已证TLR4、NF—KBmRNA含量；采用Westernblot法检测细胞实其可减轻肾间质炎性损伤J，但Art是否对肾小TLR4、NF—KB蛋白表达水平。结果①与正常对照组比较，管上皮细胞TLR4及NF—KB的表达存在影响，目前高糖组细胞TLR4、

3、NF—KBmRNA和蛋白表达水平明显升高鲜有文献报道。该实验以大鼠肾小管上皮细胞(P<0．05)；②与高糖组比较，Art小、中、高剂量组细胞TLR4、NF—KBmRNA和蛋白表达水平明显降低，且呈剂量依NRK-52E为模型，观察高糖及Art对肾小管细胞赖性(P<0．05)；③与依那普利组比较，Art小、中、高剂量组TLR4、NF．KB水平的影响，为Art应用于DN防治提细胞TLR4水平表达均升高，且Art高剂量组与依那普利组供实验依据。差异无统计学意义。与依那普利组比较，Art小、中剂量组细1材料与方法胞NF—KB水平表达升高，Art高剂量组细胞NF—

4、KB水平表达降低，且Art中、高剂量组与依那普利组差异无统计学意义。1．1材料结论Art可呈剂量依赖性地抑制高糖环境下NRK52E细1．1．1细胞来源NRK一52E购自上海复祥生物科胞TLR4、NF-KB的高表达及合成。技有限公司(源于ATCC，货号CRL一1571)。关键词糖尿病肾病；青蒿琥酯；肾小管上皮细胞；Toll样受1．1．2主要药物与试剂注射用Art(桂林南药股体4；核转录因子一KB份有限公司，批号LA130613)；马来酸依那普利原料中图分类号R587．1；R692．6药(武汉胜天宇生物科技有限公司)；低糖、高糖文献标志码A文章编号1000

5、—1492(2015)07—0904—05DMEM培养基(美国Gibco公司)；胎牛血清(美国Hyclone公司)；总RNA提取试剂盒、cDNA第一链糖尿病肾病(diabeticnephropathy，DN)本质上合成试剂盒、2×TaqMasterMix、DNAMarker(北京是一种慢性炎症性疾病，炎症反应和促炎症细胞因子在DN的发展中起着决定性作用¨J。Toll样受体天根生化科技有限公司)；PCR引物由Invitrogen(上海)贸易有限公司设计合成；WIP组织细胞裂解液、(Toll-likereceptors，TLR)是一个主要分布于炎症细(北京

6、博奥森生物技术有限公司)；BCA蛋白浓度测胞表面的受体超家族，其中TLR4(Tol1．1ikereceptor．定试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司)；SDS—4，TLR4)主要分布在肾组织，可通过激活核转录因PAGE凝胶制备试剂盒、PVDF膜(北京索莱宝科技子一KB(nuclearfactor．KB，NF-KB)而引起肿瘤坏死有限公司)；预染蛋白Marker(美国Thermo公司)；因子仅、白细胞介素8等前炎症因子的表达增加，诱兔抗鼠TLR4多克隆抗体(美国Afinity公司)；兔抗鼠NF—KBp65多克隆抗体(武汉博士德生物工程有2015—03—2

7、0接收限公司)；兔抗GAPDH多克隆IgG抗体(杭州贤至基金项目：广西医疗卫生适宜技术研究与开发项目(编号：$201316437)；生物科技有限公司)；辣根酶标记山羊抗兔IgG(北广西自然科学基金项目(编号：2012GXNSFAA053085)；广西高等学校计划科研项目(编号：201204LX245)京中杉金桥生物技术有限公司)；SuperECLPlus超作者单位：桂林医学院附属医院内分泌科，桂林541004敏发光液(北京普利莱基因技术有限公司)。作者简介：蒋姗姗，女，硕士研究生；1．2细胞培养与分组龙艳，女，教授，主任医师，硕士生导师，责任作者，E-

8、1．2．1细胞培养NRK．52E用含10％胎牛血清、mail：ly136988@163．coi