高糖刺激对大鼠近端肾小管上皮细胞脂联素受体表达的影响.pdf

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1、第34卷第5期武汉大学学报(医学版)Vo1．34No．52013年9月MedicalJournalofWuhanUniversitySept，2013高糖刺激对大鼠近端肾小管上皮细胞脂联素受体表达的影响吴少林吴小燕李维为李晓宁高苹武汉大学中南医院肾内科湖北武汉430071摘要目的：观察体外高糖环境下大鼠近端肾小管上皮细胞脂联素受体基因及其蛋白表达变化。方法：正常大鼠近端肾小管上皮细胞细胞株(NRK一52E)常规培养于含10灭活新生胎牛血清的低糖DMEM培养液传代培养，待细胞生长至亚融合状态时，更换为

2、无胎牛血清低糖DMEM培养基培养24h使其同步化，将NRK一52E细胞分为5组：A组为正常对照组，低糖DMEM完全培养液(含葡萄糖5．5mmol／L)；B组为高糖刺激12h组：高糖DMEM完全培养液(含D-葡萄糖25mmol／L)刺激12h；C组为高糖刺激24h组：高糖DMEM完全培养液刺激24h；D组为高糖刺激48h组：高糖DMEM完全培养液刺激48h；E组为高糖刺激72h组：高糖DMEM完全培养液刺激72h。然后分别提取各组总RNA和总蛋白，分别用RT—PCR检测各组目的基因AdipoR1／2m

3、RNA的表达，Western印迹法检测各组目的蛋白AdipoR1／2蛋白的表达。结果：脂联素受体1(AdipoR1)和脂联素受体2(Adi-poR2)在NRK一52E细胞中均有表达；在高糖刺激情况下，随着刺激时间的延长，目的基因AdipoR1／2mRNA的表达均有先增高后降低的趋势，在刺激24h时升高到最高点，和对照组相比有统计学意义(P<0．05)；与正常对照组相比，高糖刺激后各时间点AdipoR1／2蛋白的表达有上升的趋势，但差异无统计学意义(P>0．05)。结论：NRK～52E细胞AdipoR

4、1／2蛋白的表达不受高糖刺激的影响；高糖影响NRK一52E细胞AdipoR1／2mRNA的表达，并随着刺激时间的延长表现出先增高后降低。高糖通过影响脂联素受体基因的表达从而影响脂联素发挥其生物学作用，以致影响大鼠近端肾小管上皮细胞的功能。关键词大鼠；近端肾小管上皮细胞；脂联素；脂联素受体；高糖中图分类号R587．2文献标识码A文章编号167卜8852(2013)05—0641—05EffectsofHighLevelsGlucoseontheExpressionofAdiponectinRecept

5、orsinRatRenalProximalTubularCellsWUShaolin，WUXiaoyan，LIWeiwei，LIXiaoning，GAOPingDept．ofNeprology，ZhongnanHospitalofWuhanUniversity，Wuhan430071，ChinaAbstractobjective：Toobservetheeffectofhighglucosestimulationontheexpressionofadiponectinreceptor(AdipoR)

6、mRNAandproteininratproximaltubularepithelia1cellsinvitro．Methods：NRK一52EcellswereculturedinthelOWglucoseDMEMcontaining10heat—inactivatednewbornfeta1bovineserum．Whenthecellsreachedtoconfluence，weculturedthemintheserum—freeDMEMfor24hours．ThentheNRK一52Ece

7、llsweredividedintofivegroupsaccordingtothedif—ferenttreatment．CellsintheeontrolgroupwereculturedinDMEMlOW—levelglucosesolutioncontainingD-glucose5．5mmol／L．Allothergroupsusedhigh—levelglucosesolutionsasculturemediumwhichcontainedD-glucose25mmol／Ltocultu

8、rethecellsfor12h，24h，48hand72h课题来源：国家自然科学基金资助项目(编号：163411)作者简介：吴少林，男，1984一，医学硕士，主要从事糖尿病。肾脏病发病机制的研究通讯作者：吴小燕，女，1962一，医学博士，教授，主要从事糖尿病肾脏病防治的研究642武汉大学学报(医学版)第34卷separately．AdipoRi／2mRNAexpressionwasdetectedbyRT～PCRandtheproteinexpressionwasd