ILKsiRNA对高糖刺激的人肾小管上皮细胞GSK-313；及β-catenin表达的影响.pdf

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1、中国病理生理杂志ChineseJournalofPathophysiology2014，30(3)：503．508·503·[文章编号]1000—4718(2014)03—0503-06／LKsiRNA对高糖刺激的人肾小管上皮细胞GSK-3I3；及I3}-catenin表达的影响闰结，姚芳，张丽萍，郝军，吴海江，段惠军(河北医科大学第二医院肾内科，病理教研室，河北石家庄050000)[摘要]目的：探讨高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中整合素连接激酶小干扰RNA(ILKsiRNA)对糖原合成酶激酶3B(GSK-3B)磷酸化和B-连环蛋白(p—catenin)核内表达的影响及意义

2、。方法：体外培养人近端肾小管上皮细胞系HKC，分为正常对照组(NG)、高糖组(HG)、高糖+阴性转染对照组(HG+HK)和高糖+ILKsiRNA组(HG+ILKsiRNA)。倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达。RT—PCR及Westernblotting检测ILKmRNA及蛋白表达水平；免疫细胞化学检测磷酸化GSK-3p(p-GSK一3p)和p—catenin表达。Westernblotting检测总GSK一3p、P-GSK-313、核13-catenin、总B-catenin、E一钙黏蛋白(E-cadherin)和一平滑肌肌动蛋白(a-SMA)的表达水平。结果：(1)

3、倒置荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白表达，证实构建的siRNA重组质粒成功转染HKC细胞；(2)与HG和HG+HK组相比，HG+ILKsiRNA组ILKmRNA及蛋白水平下降，但较NG组表达仍高；(3)HG+ILKsiRNA组ILK基因沉默后，p-GSK一3p与核B．catenin蛋白表达较HG及HG+HK组均下降，但较NG组表达仍高。而总GSK-3B与总p．catenin在各组表达无明显差异。结论：ILK、GSK．3p和p—catenin可能参与了高糖介导的肾小管上皮细胞转分化过程。ILK可能通过调节Wnt／13一catenin途径下游效应蛋白GSK一3p和p—cateni

4、n的表达而促使肾小管上皮细胞转分化。[关键词]糖尿病肾病；上皮一间充质转化；整合素连接激酶；小干扰RNA；糖原合成酶激酶3B；3-连环蛋白[中图分类号]R363[文献标志码]Adoi：10．3969／j．issn．1000-4718．2014．03．020Role0f皿siRNAonexpressionofGSK-313andcatenininhumantu-bularepithelialcellsstimulatedbyhighglucoseYANZhe，YAOFang，ZHANGLi．ping，HAOJun，WUHai-jiang，DUANHui．·2jun(Depa

5、rtmentofNephrology，TheSecondHospital，DepartmentofPathology，HebeiMedicalUniversity，Shijiazhuang050000，China．E—mail：duanhj999@163．com)[ABSTRACT]AIM：ToinvestigatetheeffectsofsiRNAtargetingintegrin-linkedkinase(ILK)ontheexpressionofglycogensynthasekinase3B(GSK-3p)and13-cateninduringepithelial

6、-mesenchymaltransition(EMT)inhumankid—neyproximaltubularepithelialcelllineHKCinducedbyhighglucose．METHODS：HKCcellsweredividedinto4groups：normalgIucose(NG)group，highglucose(HG)group，HG+HK(avectorcontainingthenon-specificsiRNAdesignedasnegativecontro1)groupandHG+ILKsiRNAgroup．Theinvertedflu

7、orescencemicroscopewasusedtoexaminetheexpressionofgreenfluorescentprotein(GFP)．TheexpressionofILKatmRNAandproteinlevelswasdetectedbyRT—PCRandWesternblotting．Theexpressionofp-GSK-313and13-eateninwasobservedbyimmunocytochemicalstaining．TheproteinexpressionoftotalGSK-3