qdpr基因过表达、敲低及k93t突变对高糖环境下肾小管上皮细胞的影响及其机制

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1、中图分类号：R587.2论文编号：HBLG2015-249UDC：密级：公开硕士学位论文QDPR基因过表达、敲低及K93T突变对高糖环境下肾小管上皮细胞的影响及其机制作者姓名：蒲志杰学科名称：内科学研究方向：内分泌与代谢病学学习单位：华北理工大学学习时间:3年提交日期:2015年5月9日申请学位类别：临床医学硕士导师姓名：张景义教授单位：华北理工大学附属开滦总医院李治国副教授单位：华北理工大学医学实验研究中心论文评阅人：徐应军教授单位：华北理工大学高景利教授单位：华北理工大学附属开滦总医院论文答辩日期：2015年6月12日答辩委员会主席：杨方教授关键词：QDPR；糖尿病肾病；肾小

2、管上皮细胞；唐山华北理工大学2015年6月EffectandMechanismofQDPRGeneOverexpression,KnockdownandK93TMutationonRenalTubularEpithelialCellsinHighGloucoseConditionDissertationSubmittedtoNorthChinaUniversityofScienceandTechnologyinpartialfulfillmentoftherequirementforthedegreeofMasterofClinicalMedicinebyPuZhijie(Int

3、ernalMedicine)ProfessorZhangJingyiSupervisor:Ph.D.LiZhiguoJune,2015独创性说明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得华北理工大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。论文作者签名：日期：2015年6月12日关于论文使用授权的说明本人完全了解华北理工大学有关保留、使用学位论文的规定，即：已获

4、学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检索和交流。作者及导师同意论文公开及网上交流的时间：□自授予学位之日起；□自年月日起。作者签名：导师签名：签字日期：2015年6月12日签字日期：2015年6月12日摘要目的通过研究QDPR基因过表达、敲低及K93T突变对高糖环境下肾小管上皮细胞TGF-β1、CTGF、VEGF蛋白含量的影响，探讨QDPR基因活性改变在DN发生发展中的作用及其机制。方法westernblot方法检测QDPR蛋白在大鼠肝、脑、肾皮质、

5、肾髓质中的表达情况。免疫组化方法检测QDPR蛋白在大鼠和人肾脏中的定位情况。用慢病毒感染肾小管上皮细胞系NRK-52E，制作QDPR过表达、敲低及K93T细胞模型。基于此模型，研究高糖环境下（30mmol／L）QDPR基因改变对TGF-β1、CTGF、VEGF蛋白含量的影响，实验采取以下分组：1NRK-52E对照组（NRK-52EControl，NC）2NRK-52E高糖组（NRK-52EexposedtoHighglucose，NHG）3空载过表达病毒对照组（overexpressionlentiviruscontrol，LV-OCON）4空载过表达病毒高糖组（overexpr

6、essionlentiviruscontrolexposedtoHighglucose，LV-OCON-HG）5QDPR基因过表达组（lentivirusoverexpressedQDPR，LV-QDPR）6QDPR基因过表达高糖组（lentivirusoverexpressedQDPRexposedtoHighglucose，LV-QDPR-HG）7QDPR蛋白K93T突变组（lentivirusoverexpressedK93TQDPR，K93T-QDPR）8K93T突变过表达高糖环境组（lentivirusoverexpressedK93TQDPRexposedtoHigh

7、glucose，K93T-QDPR-HG）9敲低对照组（LV-SHCON）10敲低对照高糖组（LV-SHCON-HG）11QDPR基因敲低组（LV-SHQDPR）12QDPR基因敲低对照组（LV-SHQDPR-HG）。每组细胞重复3皿，测定高糖环境下QDPR及K93T突变对其酶活性的影响；对各组用western-blot法检测高糖环境下QDPR表达改变及K93T突变对TGF-β1、CTGF和VEGF蛋白含量的影响。结果1QDPR蛋白在大鼠肝、脑、肾皮质、肾髓质中高表达，胰腺中等量