戊地昔布对高糖培养的肾小管上皮细胞增殖的影响及其调控机制

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1、戊地昔布对高糖培养的肾小管上皮细胞增殖的影响及其调控机制作者：刘淑霞张玉军刘青娟唐丽娟段惠军【摘要】目的探讨戊地昔布对高糖培养的肾小管上皮细胞增殖、核因子（NF）κΒ、环氧合酶（COX)2表达的影响。方法将常规培养的人肾小管上皮细胞分为正常糖、高糖和高糖加200μmol/L戊地昔布组，72h后收集细胞，采用流式细胞术检测细胞的增殖指数（PI）；免疫细胞化学检测肾小管上皮细胞增殖细胞核抗原（PA）和NFκB蛋白的表达变化，流式细胞术检测肾小管上皮细胞中NFκB和COX2蛋白的表达情况。结果（1）与正常糖组比较，高糖组肾小管上皮细胞

2、PA表达增强和PI升高(P＜0.01或P＜0.05)；而戊地昔布能够降低高糖培养的肾小管上皮细胞PA的表达和PI(P＜0.01)。（2）正常糖组，NFκB主要表达在肾小管上皮细胞的细胞浆内，而高糖组NFκB表达增强，阳性表达主要定位于肾小管上皮细胞的细胞核内；高糖能够上调肾小管上皮细胞NFκB活化和COX2蛋白的表达(P＜0.01)；高糖加戊地昔布组NFκB及COX2表达均降低(P＜0.01)。（3）NFκB和COX2呈显著正相关；同时COX2蛋白表达与PI呈显著正相关(P＜0.01)。结论降低NFκB活化、下调COX

3、2蛋白表达从而降低肾小管上皮细胞增殖可能是戊地昔布保护糖尿病时肾脏损伤的机制之一。【关键词】戊地昔布；高糖;人肾小管近端上皮细胞；核因子κB；环氧合酶2【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectofvaldecoxibonthePI,NFκB/COX2signalpathanrenalproximaltubularcells(HKCs)culturedinhighglucosemedium.MethodsHKCsal,highglucosemediumorhighglucose+200μm

4、ol/Lfor72h.ThePIetry;TheexpressionsofNFκBandCOX2protEinetryandtheexpressionofPAmunocytochemicalstaining.Results(1)paredalglucosemediumgroup,theexpressionofPAandPIediumgroup,alglucosemediumgroup,NFκB,andtheyedium.TheexpressionsofNFκBandCOX2inhighglucosemediumgroupalgl

5、ucosemediumgroup;erenalprotectiveeffectondiabeticnephropathy,partlythroughinhibitionofcellproliferationbydoanrenalproximaltubularcells(HKCs);Proliferation;NuclearfactorkappaB;Cyclooxygenase2近年研究表明，环氧合酶2（COX2）在肾小管上皮细胞中的表达升高可能与糖尿病的肾脏损害有关〔1〕。戊地昔布是特异性COX2抑制剂，主要用于治疗骨关节炎、类风湿

6、关节炎和原发性痛风〔2，3〕。本课题组前期研究发现其能够抑制肿瘤细胞的生长〔4〕，但其对糖尿病肾病（DN）的作用尚未见报道。本研究通过检测人肾小管近端上皮细胞（humanrenalproximaltubularcells,HKCs）核因子（NF）кB、COX2蛋白的表达，观察戊地昔布是否抑制高糖培养的HKCs增殖情况，并探讨其作用的可能机制。1资料与方法1.1药品与试剂戊地昔布由河北医科大学药学院合成〔5〕，纯度99%，用DMSO配成250mmol/L母液，临用前稀释，浓度为200μmol/L；兔抗NFκB（SantaCruz公司）

7、、COX2（Labvision公司）多克隆抗体，小鼠抗人增殖细胞核抗原（PA）单克隆抗体（北京中山生物工程公司），免疫组化试剂盒购自晶美公司。1.2细胞HKC由解放军总医院陈香美教授惠赠。1.3主要仪器设备流式细胞仪（EpicsXLⅡ型，美国），CO2培养箱（日本三洋公司产品）。1.4HKC的培养取对数生长期的HKC，用2.5g/L胰蛋白酶消化，按1×104个/孔接种于6孔板和100ml培养瓶中，待细胞贴壁6h后，轻轻吸去上清，加入葡萄糖浓度分别为5.4、30和30mmol/L+200μmol/L的戊地昔布培养基，于培养的72h时收集

8、细胞，6孔板用于免疫细胞化学检测，收集培养瓶中的细胞用于流式细胞学检测。1.5流式细胞仪检测细胞的增殖活性收集培养72h后培养瓶中的细胞，70%的乙醇固定；取1×105/ml细胞，加入10%鸡