戊地昔布对高糖培养肾小管上皮细胞增殖影响及其调控机制.doc

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1、戊地昔布对高糖培养肾小管上皮细胞增殖影响及其调控机制作者：刘淑霞张玉军刘青娟唐丽娟段惠军【摘要】目的探讨戊地昔布对高糖培养的肾小管上皮细胞增殖、核因子(NF)kB、环氧合酶(COX)2表达的影响。方法将常规培养的人肾小管上皮细胞分为正常糖、高糖和高糖加200umol/L戊地昔布组，72h后收集细胞，采用流式细胞术检测细胞的增殖指数(PI)；免疫细胞化学检测肾小管上皮细胞增殖细胞核抗原(PCNA)和NFkB蛋白的表达变化，流式细胞术检测肾小管上皮细胞中NFkB和COX2蛋白的表达情况。结果(1)与正常糖组比较，高糖组肾小管上皮细胞PCNA表达增强和PI升高(P<0.01或PV0.

2、05)；而戊地昔布能够降低高糖培养的肾小管上皮细胞PCNA的表达和PI(P<0.01)。(2)正常糖组，NFkB主要表达在肾小管上皮细胞的细胞浆内，而高糖组NFkB表达增强，阳性表达主要定位于肾小管上皮细胞的细胞核内；高糖能够上调肾小管上皮细胞NFkB活化和C0X2蛋白的表达(P<0.01)；高糖加戊地昔布组NFkB及COX2表达均降低(PV0.01)。(3)NFkB和COX2呈显著正相关；同时COX2蛋白表达与PI呈显著正相关(P<0.01)。结论降低NFkB活化、下调COX2蛋白表达从而降低肾小管上皮细胞增殖可能是戊地昔布保护糖尿病时肾脏损伤的机制之一。【关键词】戊地昔布；

3、高糖；人肾小管近端上皮细胞；核因子kB；环氧合酶2[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheeffectofvaldecoxibonthePI,NFkB/COX2signalpathwayofhumanrenalproximaltubularcells(HKCs)culturedinhighglucosemedium・MethodsHKCswereculturedseparatelyinnormal,highglucosemediumorhighglucose+200umol/Lfor72h・ThePIwasdetectedbyf1owcytomet

4、ry；TheexpressionsofNFkBandCOX2proteinweredetectedbyflowcytometryandtheexpressionofPCNAwasdetectedbyimmunocytochemicalstaining.ResuIts(1)Comparedwiththoseinnormalglucosemediumgroup,theexpressionofPCNAandPIwereincreasedinhighglucosemediumgroup,whilevaldecoxibdecreasedtheexpressionofPCNAandPI.(

5、2)Innormalglucosemediumgroup,NFkBwerepositivelyexpressedincytoplasm,andtheywereexpressedinnucliofHKCsculturedinhighglucosemedium・TheexpressionsofNFkBandCOX2inhighglucosemediumgroupwerehigherthanthoseinnormalglucosemediumgroup；whichweredecreasedinhighglucose+valdecoxibgroup・⑶TheexpressionsofN

6、FkBandPIwerepositivelycorrelatedwiththeexpressionofCOX2.ConclusionsValdecoxibhassomerenalprotectiveeffectondiabeticnephropathy,partlythroughinhibitionofcellproliferationbydownregulatingNFkBanddecreasingtheexpressionofCOX2.[Keywords]Valdecoxib；Highglucose；Humanrenalproximaltubularcells(HKCs)；

7、Proliferation；NuclearfactorkappaB；Cyclooxygenase2近年研究表明，环氧合酶2(COX2)在肾小管上皮细胞中的表达升高可能与糖尿病的肾脏损害有关(1〕。戊地昔布是特异性C0X2抑制剂，主要用于治疗骨关节炎、类风湿关节炎和原发性痛风(2,3)。本课题组前期研究发现其能够抑制肿瘤细胞的生长〔4〕，但其对糖尿病肾病(DN)的作用尚未见报道。本研究通过检测人肾小管近端上皮细胞(humanrenalproximaltubularcells,HKCs)核因子(