高糖刺激INS-1细胞DNase Ⅰ表达升高对细胞凋亡的影响.pdf

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1、中日友好医院学报2014年第28卷第3期JournalofChina-JapanFriendshipHospital，2014Jun，Vo1．28，』v0．3l57高糖刺激INS一1细胞DNaseI表达升高对细胞凋亡的影响朱斌．一，李平。，严美花，赵婷婷，王华(1．中国医学科学院北京协和医学院研究生院，北京100730；2．中日友好医院临床医学研究所，北京100029)摘要目的：探讨脱氧核糖核酸酶I(DNaseI)在高糖引起的胰岛B细胞凋亡过程中的作用。方法：实验分3组。正常组、高糖组和高糖+DNaseIsiRNA组。其中正常组给予含有11．1mmo1]L葡萄

2、糖浓度的培养基外，其余2组均给予葡萄糖浓度为30mmol／L的培养基。通过转染外源性DNaseIsiRNA，敲降高糖培养的INS一1细胞内DNaseI的表达。采用Westernblot检测DNaseI、caspase一3蛋白表达，流式细胞仪观察细胞凋亡的变化。结果：与正常组相比，高糖可以显著增加INS一1细胞DNaseI和caspase一3的蛋白表达水平(P

3、05)。流式细胞仪结果显示，高糖明显导致细胞凋亡率升高(16．7％)，而敲降DNaseI后则明显减少细胞凋亡的发生(9．9％)。结论：高糖可以诱导细胞内DNaseI的表达升高，从而介导胰岛B细胞的凋亡，该研究可能为胰岛B细胞凋亡的机制研究提供新的证据。关键词：脱氧核糖核酸酶I；B细胞；凋亡中图分类号：R329．2+6文献标识码：A文章编号：1001—0025(2014)03—0157—04doi：10．39690．issn．1001—0025．2014．03．008EfectsofhighglucosesimulatedDNaseIincreaseonINS-

4、1cellapoptosis／／ZHUBin，LIPing，YANMei—hua，etal／／JournalofChina-JapanFriendshipHospital，2014Jun，28(3)：157-160AbstractObjective：ToinvestigatetheeffectsofDNaseIintheprocessof[3cellapoptosisinhighglucoseenvironment．Methods：INS-tcellwassimulatedby30mmol／Lglucose，andweredividedintothreegro

5、ups：normalgroup，highglucosegroup，andhighglucoseplussiRNAgroup．TheNormalgroupwasculturedinthemediumwith11．1mmol／Lglucoseconcentration，andtheother2groupwasculturedinthe30mmol／Lglucose．DNaseIlevelwasknockeddownbysiRNAinhighglucoseplussiRNAgroup，cellapoptosisratewasevalu—atedbyflowcytom

6、etryandtheproteinlevelofDNaseIandcaspase一3wasobservedbyWesternblot．Re·suits：ComparedwithnolTnalgroup，highglucosecanincreasetheDNaseIandcaspase-3expressioninhighglucosegroup．However，DNaseIknockeddowncansignificantlylowerthecaspase-3expression．Theflowcy—tometryresultsshowedthathighglu

7、cosecancauseINS-1cellapoptosisrateincrease(16．7％)，howeverwhenDNase1wasknockeddown，theapoptosisrate(9．9％)canbegreatlyreduced．Conclusion：HighglucosecancauseINS一1cellapoptosisbyincreasetheexpressionofDNaseI．KeywordsdeoxyribonucleaseI；Bcells；apoptosisAuthor’SaddressGraduateSchoolofPekin

8、gUnionMedicalCoHege