磷酸化FOX01对高糖刺激的人肾小管上皮细胞脂质沉积的影响.pdf

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1、中国病理生理杂志ChineseJournalofPathophysiology2013，29(11)：2001-2005[文章编号]1000-4718(2013)11-2001—05磷酸化FOXO1对高糖刺激的人肾小管上皮细胞脂质沉积的影响木朱琳，刘青娟，徐宁，要红叶，邢玲玲，李凡，刘淑霞，郝军(河北医科大学第三医院肌电图室，河北石家庄050051；河北医科大学病理学教研室，河北石家庄050017)[摘要]目的：研究叉头框蛋白01(FOXO1)表达和磷酸化过程对高糖刺激下人肾小管上皮细胞脂质沉积的影响。方法：体外培养人肾小管上皮细胞株HKC，给予高糖刺激后

2、免疫荧光及Westernblotting检测总FOXO1、磷酸化FOXO1和固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)的表达，油红0染色测定细胞内脂质沉积；构建野生型和磷酸化位点突变型FOXO1质粒，转染入HKC细胞后给予高糖刺激，采用免疫荧光、Westernblotting和油红O染色确定FOXO1磷酸化位点突变对肾小管上皮细胞脂质代谢的影响。结果：高糖刺激HKC细胞48h后，总FOXO1在正常糖组和高糖组的表达未见差异，而磷酸化FOXO1及SREBP一1表达明显上调，细胞内脂滴显著增加。将构建的野生型FOX01质粒转染人细胞后，上调了总FOXO1和磷酸化F

3、OXO1的表达，增加了SREBP．1表达和细胞内脂滴含量；而磷酸化位点突变的FOXO1质粒避免了高糖诱导引起的SREBP．1上调和细胞内脂质沉积。结论：磷酸化FOXO1参与了高糖诱导的肾小管上皮细胞SREBP一1上调和细胞内脂质聚集；磷酸化位点的突变可避免高糖引起的肾小管上皮细胞SREBP．1上调和脂质沉积。[关键词]糖尿病肾病；高糖；HKC细胞；FOXO1蛋白；脂质沉积[中图分类号]R692．6[文献标志码]Adoi：10．3969／j．issn．1000—4718．2013．11．015Efectofphospho-·FOXO1onlipiddepos

4、itinhighglucose·-stimulatedhu-mallrenaltubularcellsZHULin，LIUQing-juan，XUNing，YAOHong—ye，XINGLing-ling，LIFan，LIUShu．xia．HAOJun(DepartmentofElectromyography，theThirdAffiliatedHospitalofHebeiMedicalUniversity，Shijiazhuang050051，China；DepartmentofPathology，HebeiMedicalUniversity，Shij

5、iazhuang050017，China．E—mail：ha~un2004@hotmail．corn)[ABSTRACT]AIM：TostudytheeffectofforkheadboxO1(FOXO1)expressionandphosphorylationonlipidaccumulationinhighuc0se—stimulatedhumanrenaltubularcelllineHKC．METHODS：HKCcellswerestimulatedwithhighglucose．ThetotalFOXO1，phospho-FOXO1andster

6、ol—regulatoryelement—bindingprotein1(SREBP-1)weredetee—tedbythemethodsofimmunofluorescenceandWesternblotting．ThecellularlipiddepositwasmeasuredbyoilredOstai-ning．Moreover，thewild—typeFOX01vectorormutantFOXO1vectorwastransfectedintoHKCceilsfollowedbythetreat—mentwithhighglucose．Imm

7、un0仃uorescence．WesternblottingandoilredOstainingwereusedtodeterminetheefectofthephosphorylationsitemutationonthelipidmetabolisminrenaltubularcells．RESULTS：NodifferenceintotalFOXO1expressionbetweennormalglucosegroupandhighglucosegroupwasobserved48hafterHKCcellswerestimulatedwithhig

8、hucose．However，phospho—FOXO1wassi