鸡传染性支气管炎病毒检测技术综述.pdf

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1、鸡传染性支气管炎病毒检测技术综述刘兴利(北京中农榜样蛋鸡育种有限责任公司102100)中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：1673—1085(2011)10—0045—04鸡传染性支气管炎vianInfectiousBronchitis，一般在接种后48h收获鸡胚尿囊液。因毒株不同，简称IB)是由冠状病毒科、冠状病毒属的鸡传染性达到病毒最高滴度的时间会有所差异，但是通常支气管炎病毒(IBV)引起鸡的急性、高度接触性传在36—72h病毒滴度达到最高【。～l。刘田生等报道，染病，主要侵害鸡的呼吸系统、泌尿生殖系统和消接种10日龄鸡胚较9日龄鸡胚

2、病毒液收获量大[61化系统等，可导致不同日龄的鸡发生不同程度的。接种后6—7d，鸡胚即出现矮小、蜷缩等传支的危害。IBV往往引起混合感染(如新城疫、慢性呼典型病变。临床病料一般要经过2-3代甚至更多吸道病等)，并可继发细菌性疾病如大肠杆菌病、代次盲传才能引起典型病变。传支病毒引起的病沙门氏菌病等，从而加重了对鸡群的危害。因IB变因毒株和代次的不同而有所差异。通常，毒力引起产品质量下降所造成的损失，通常比死亡造强、传代次数高的毒株引起的胚变更加明显。成的损失还大，是目前危害我国养禽业的主要疫1．2气管环接种一般采用19～20日龄的SPF病之一[“。鸡胚制备

3、气管环，气管环的处理要尽量的薄而完目前，已有多种检测技术用于鸡传染性支气整，否则会为显微镜下病变的观察增加难度。接种管炎病毒的诊断。但是基本上都是通过对传染性气管环后，36h左右即可以看到纤毛摆动停止，上支气管炎病毒的抗原、抗体和病毒核酸的检测来皮细胞脱落、萎缩等病变，并在3-5d左右病毒达实现对传染性支气管炎的诊断。本文对常用的传到最高滴度【5，。对于初次分离的临床病料，不需在染性支气管炎的诊断技术进行综述。气管环上适应，即可引起气管纤毛摆动停止或活1病毒分离性下降等病变。气管环接种常用于传支病毒的血病毒分离试验最为简单、实用、敏感性高，为清型鉴定。世

4、界各国所采用，但是费时费力。病毒分离通常在1．3细胞培养细胞培养一般不用于病毒的初鸡胚、气管环和细胞上进行。传支病毒在以上3种次分离，并且一般要在细胞上适应几代后才会出培养系统中引起的病变都不具有特异性_2]，因此现细胞病变。病毒在鸡胚中传代时间越长，越容易病毒分离试验常常与PCR、间接免疫荧光、夹心适应细胞培养[5]。已经证明传支病毒可以在鸡胚成ELISA、电镜观察等检测技术同时使用，这样不仅纤维细胞、鸡胚肾细胞、鸡胚肝细胞及Vero等细可以提高检测的特异性，也能减少检测时间。胞中培养增值。1．1鸡胚接种鸡胚接种是分离传支病毒最常2EUSA用的方法，通

5、过尿囊腔途径接种9—11日龄鸡胚，酶联免疫吸附试验以其特异性强、敏感性高、收稿日期：2011—08—16可以进行大量样本的检测，广泛应用于抗原、抗体成就未来的检测。果表明，以单抗包被反应板要优于用多抗、病毒包2．1间接ELISA间接ELISA是最常用的抗体检被反应板【l6]。测方法。目前，已经有多种用于抗体检测的商品化2．3阻断ELISA阻断ELISA即可以用于抗原的试剂盒出售。商品化的ELISA试剂盒均采用全病检测，又可以用于抗体的检测。KaracaK等利用单毒包被酶标板，检测的为群特异性抗体，不能区分克隆抗体介导的阻断ELISA可以对血清型进行鉴血清

6、型，亦不能区分疫苗免疫抗体和野毒感染产定[17】。MovingV等利鼠源单抗建立的阻断ELISA生的抗体。通过对临床样本的抗体进行测定，并结方法对临床样品进行检测取得了良好的结果】。合自身的免疫程序以及疫苗抗体与野毒抗体的变2．4斑点酶联吸附试验(Dot-ELISA1Dot—化规律，可以对传支的诊断起到指导作用。对大量ELISA是在ELISA基础上发展起来的一项免疫学临床样本及疫苗免疫后抗体变化的监测发现，疫检测技术，具有方法简单、快速、敏感性高、特异性苗免疫ELISA抗体一般低于15000，而野毒感染抗强、样品用量少、不需特殊仪器、结果可以直接用肉体滴

7、度可以达到20000甚至更高，从而为诊断提眼观察等特点。阎芳等对自然感染和人工感染的病供依据。除了商品化试剂盒外，许多单位开发研制料均取得了较好的检出率，分别达到70％和85％左了自己的抗体检测试剂盒，并取得了与商品化试右，显著高于琼脂扩散试验]。王富晓等对利用单剂盒相近的检测效果_8_9_。近些年来，随着分子生克隆抗体介导的Dot—ELISA检测病毒进行了研究，物学技术的发展，用重组表达的蛋白代替全病毒对鸡胚尿囊液中的病毒取得了较高的检出率[2Ol。刘包被酶标板的报道越来越多[10-13】。以重组表达的蛋红等对传染性气管炎疑似临床样本进行了检测，其白代

8、替全病毒包被酶标板，可以取消大量病毒的结果与病毒分离达到90％的符合率【2l】。