鸡传染性支气管炎病毒rt-pcr快速检测方法的建立

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1、中国农学通报2011,27(03):342-346ChineseAgriculturalScienceBulletin鸡传染性支气管炎病毒RT-PCR快速检测方法的建立1111112刘金朋，商艳红，陈红英，王淑娟，王子馨，王亚丹，师丽刚（1河南农业大学牧医工程学院，郑州450002；2洛阳市动物疫病预防控制中心，河南洛阳471002）摘要：根据鸡传染性支气管炎病毒（IBV）N基因序列（FJ767920），利用引物软件Premier5.0，设计并合成了1对特异引物，通过RT-PCR扩增条件的优化，建立了一种快速检测IBV的

2、RT-PCR方法。应用该方法成功地从IBVM41和河南株HN99中扩增出318bp的目的片段，而传染性喉气管炎病毒、新城疫病毒及马立克病毒基因组均未扩增出相应的片段。将回收的RT-PCR产物克隆到pGEM-TEasy载体后测序，进一步证实RT-PCR检测方法的特异性。对IBV的最低检出量为0.6pg的cDNA。经初步应用表明，该方法的建立为IBV的早期诊断和临床检测奠定基础。关键词：鸡传染性支气管炎病毒；RT-PCR；检测中图分类号：S855.3文献标志码：A论文编号：2010-2929DevelopmentofRT-P

3、CRforRapidDetectionofInfectiousBronchitisVirus1111112LiuJinpeng,ShangYanhong,ChenHongying,WangShujuan,WangZixin,WangYadan,ShiLigang(1CollegeofAnimalHusbandryandVeterinary,HenanAgriculturalUniversity,Zhengzhou450002;2LuoyangCenterforAnimalDiseasesControlandPrevent

4、ion,LuoyangHenan471002)Abstract:Apairofprimerswasdesignedaccordingtoaconservedregionofinfectiousbronchitisvirus(IBV)Ngene(FJ767920),reversetranscriptase-polymerasechainreaction(RT-PCR)forrapiddetectionofIBVwasdevelopedbyoptimizingamplificationconditionssuchasconc

5、entrationsofprimersforRT-PCR.A318bpfragmentwasamplifiedfromIBVM41strainandNephropathogenicIBVHN99strain,respectively,butnotfrominfectiouslaryngotracheitisvirus,NewcastlediseasevirusandMareksdiseasevirus.ThisamplifiedfragmentwasclonedintopGEM-TEasyvectorandsequenc

6、ed.TheresultshowedthatthisamplifiedfragmentwasspecificforIBVcDNA.ThismethodcoulddetectthetemplatecDNAof0.6pgforIBV.ClinicaldetectionofIBVbyRT-PCRshowedthatthisimprovedRT-PCRapproachcouldbeafast,simpleandspecificdetectionmethodforIBV.Keywords:infectiousbronchitisv

7、irus;RT-PCR;detection0引言病变而引起死亡，死亡率一般为20%~30%，有时高达鸡传染性支气管炎（Infectiousbronchitis，IB）是由40%~90%。产蛋鸡感染则使产蛋量下降，蛋品质降鸡传染性支气管炎病毒（IBV）引起鸡的一种急性、高低，还可导致感染的肉鸡生产能力下降，使鸡的增重和[1]度接触性、呼吸道传染病。迄今为止，IBV感染已有饲料报酬降低，死淘率增加。自1930年在美国北达科[2][3]呼吸型、肾型、腺胃型、肠型等多种致病型，其中还有他州发现该病以来，现已遍及世界各地。中国在2

8、0[4]一些变异的中间体，IBV主要侵害鸡的呼吸系统、泌尿世纪50年代发现该病，李康然等于1990年在广西分生殖系统和消化系统。雏鸡感染后由于呼吸道或肾脏离了一株肾型IBV，1992年以后中国IB的流行呈上升基金项目：国家“十一五”科技支撑计划专项（2006BAD06A08）。第一作者简介：刘金朋，男，1983年出生