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《抗鸡传染性支气管炎病毒单链抗体间接ELISA筛选方法的建立.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第29卷第2期上海交通大学学报(农业科学版)Vo1.29NO.22011年4月J0URNAL0FSHANGHAI儿A0T0NGUNIVERSITY(AGRICULTURALSCIENCE)Apr.2011文章编号:1671—9964(2011)02—0064—05DOI:10.3969/J.ISSN.1671—9964.201l_02.012抗鸡传染性支气管炎病毒单链抗体间接ELISA筛选方法的建立赵蕾,林源,李本强,朱建国(上海交通大学农业与生物学院,上海市兽医生物重点实验室,上海200240)摘要:建立一种筛选特异性单链抗体的间接ELISA优化方法。用鸡
2、传染性支气管炎病毒IBV—M41株接种SPF鸡胚,纯化后作为抗原包被96孔板进行间接ELISA,从本实验室构建的原核表达质粒pOPE101一xP_scFv/JM109(DE3)中筛选出针对IBV—M41株的scFv,并对各反应参数进行探索,优化筛选方法。通过敏感性实验、交叉性实验、重复性实验评估优化后的筛选方法。优化的反应条件为,包被抗原1:20稀释(61.36/~g/mL),4℃包被过夜;2脱脂奶粉37℃封闭1h;含可溶性scFv的待测样品1:100稀释(142.7/~g/mL),37℃作用2h;MYC鼠单抗1:2000稀释,37℃作用2h;羊抗鼠抗抗体1
3、:4000稀释,37℃作用1h。敏感性实验显示样品中的scFv浓度的最低检出量为17.83/,g/mL;特异性实验显示筛选出的scFv只与IBV-M41株特异性结合;重复性实验的板间、板内变异系数分别为2.78、2.56。建立的筛选scFv的间接ELISA方法有较好的敏感性、特异性、稳定性,为scFv的深入研究奠定基础。关键词:单链抗体;传染性支气管炎;间接ELISA;筛选中图分类号:S858.31文献标识码:AEstablishmentofanIndirectELISAScreeningMethodfortheDetectionoftheSingle—ch
4、ainFragmentsVariableAntibodiesAgainstInfectiousBronchitisVirusZHAOLei,LJNYuan,Lj.Ben—qiang,ZHUJian—guo(KeyLaboratoryofVeterinaryBiology,SchoolofAgricultureandBiology,ShanghaiJiaotongUniversity,Shanghai200240,China)Abstract:Inordertofurtherdevelopsingle—chainfragmentsvariable(scFv)a
5、gainstInfectiousBronchitisVirusM41isolate(IBM41),weestablishedanindirectELISAmethodforscreeningscFv,whichcouldspecificallybindwithIBV—M41.IBV—M41isolatewasinoculatedintoSPFchickenembryos.ELISAplateswerecoatedwithpurifiedIBV—M41andspecificscFvswerescreened.TheELISAreactionparameters
6、werestudiedandoptimized.Theoptimizedconditionsforthistechniquewereasfollows:IBV-M41wasdilutedby20fold(61.36~g/mL)asthecoatingantigenandtheplatewasincubatedat4℃overnight,followedbyblockingin37℃for1husing2skimmilkpowder.SolublescFvdilutedby100fold(142.7~g/mL)was收稿日期:2011-01—24基金项目:“上
7、海交大一美国Raybiotech联合开展抗体工程研究”科技合作项目作者简介:赵蕾(1986一),女,硕士研究生,研究方向:预防兽医学,E-mail:aaa860403@163.com;朱建国(1962一),男,博士,研究员,研究方向:抗体工程与动物疫病防治,E—mail.zhujg@sjtu.edu.CFI第2期赵蕾,等:抗鸡传染性支气管炎病毒单链抗体间接ELISA筛选方法的建立65addedtotheplateandallowedtoreactin37℃for2h.ThenMyc—TagMousemAbdilutedby2000foldwasapplied
8、andthereactionwasconducted
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