抗鸡传染性支气管炎病毒单链抗体间接ELISA筛选方法的建立.pdf

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1、第29卷第2期上海交通大学学报(农业科学版)Vo1．29NO．22011年4月J0URNAL0FSHANGHAI儿A0T0NGUNIVERSITY(AGRICULTURALSCIENCE)Apr．2011文章编号：1671—9964(2011)02—0064—05DOI：10．3969／J．ISSN．1671—9964．201l_02．012抗鸡传染性支气管炎病毒单链抗体间接ELISA筛选方法的建立赵蕾，林源，李本强，朱建国(上海交通大学农业与生物学院，上海市兽医生物重点实验室，上海200240)摘要：建立一种筛选特异性单链抗体的间接ELISA优化方法。用鸡

2、传染性支气管炎病毒IBV—M41株接种SPF鸡胚，纯化后作为抗原包被96孔板进行间接ELISA，从本实验室构建的原核表达质粒pOPE101一xP_scFv／JM109(DE3)中筛选出针对IBV—M41株的scFv，并对各反应参数进行探索，优化筛选方法。通过敏感性实验、交叉性实验、重复性实验评估优化后的筛选方法。优化的反应条件为，包被抗原1：20稀释(61．36／~g／mL)，4℃包被过夜；2脱脂奶粉37℃封闭1h；含可溶性scFv的待测样品1：100稀释(142．7／~g／mL)，37℃作用2h；MYC鼠单抗1：2000稀释，37℃作用2h；羊抗鼠抗抗体1

3、：4000稀释，37℃作用1h。敏感性实验显示样品中的scFv浓度的最低检出量为17．83／,g／mL；特异性实验显示筛选出的scFv只与IBV-M41株特异性结合；重复性实验的板间、板内变异系数分别为2．78、2．56。建立的筛选scFv的间接ELISA方法有较好的敏感性、特异性、稳定性，为scFv的深入研究奠定基础。关键词：单链抗体；传染性支气管炎；间接ELISA；筛选中图分类号：S858．31文献标识码：AEstablishmentofanIndirectELISAScreeningMethodfortheDetectionoftheSingle—ch

4、ainFragmentsVariableAntibodiesAgainstInfectiousBronchitisVirusZHAOLei，LJNYuan，Lj．Ben—qiang，ZHUJian—guo(KeyLaboratoryofVeterinaryBiology，SchoolofAgricultureandBiology，ShanghaiJiaotongUniversity，Shanghai200240，China)Abstract：Inordertofurtherdevelopsingle—chainfragmentsvariable(scFv)a

5、gainstInfectiousBronchitisVirusM41isolate(IBM41)，weestablishedanindirectELISAmethodforscreeningscFv，whichcouldspecificallybindwithIBV—M41．IBV—M41isolatewasinoculatedintoSPFchickenembryos．ELISAplateswerecoatedwithpurifiedIBV—M41andspecificscFvswerescreened．TheELISAreactionparameters

6、werestudiedandoptimized．Theoptimizedconditionsforthistechniquewereasfollows：IBV-M41wasdilutedby20fold(61．36~g／mL)asthecoatingantigenandtheplatewasincubatedat4℃overnight，followedbyblockingin37℃for1husing2skimmilkpowder．SolublescFvdilutedby100fold(142．7~g／mL)was收稿日期：2011-01—24基金项目：“上

7、海交大一美国Raybiotech联合开展抗体工程研究”科技合作项目作者简介：赵蕾(1986一)，女，硕士研究生，研究方向：预防兽医学，E-mail：aaa860403@163．com；朱建国(1962一)，男，博士，研究员，研究方向：抗体工程与动物疫病防治，E—mail．zhujg@sjtu．edu．CFI第2期赵蕾，等：抗鸡传染性支气管炎病毒单链抗体间接ELISA筛选方法的建立65addedtotheplateandallowedtoreactin37℃for2h．ThenMyc—TagMousemAbdilutedby2000foldwasapplied

8、andthereactionwasconducted