鸡病毒性关节炎病毒增殖特性与间接elisa抗体检测方法的建立研究

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1、四川农业大学硕士毕业论文nmMWSDS-PAOEⅡ'ASNPCRmmhdr／minELISABSAPBSPBSTCBSTMBSODNDVmDV缩写说明纳米分子量聚丙烯酰胺凝胶电泳间接荧光抗体试验血清中和试验聚合酶联式反应分钟小时天转愤酶联免疫吸附试验牛血清白蛋白磷酸盐缓冲液洗涤液碳酸盐缓冲液3-3’—5．5’．四甲基联苯胺标准差光密度吸收值鸡新城疫病毒鸡传染性法氏囊病病毒论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农

2、业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。髋蝼锄俸槲≥柙年，关于论文使用授权的声明i月多口日本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表，传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名；导师签名：体猾澜Ⅷ年f月?e日。哆年6月；。日四川农业大学硕士毕业论文摘要本研究对鸡病毒性关节炎病毒(ARV)鸡胚增殖特性进行

3、了探索，建立了检测该病抗体的间接ELISA方法，为开展该病的病原分离鉴定、疫病诊断和流行病学调查奠定了基础。‘种毒经鸡胚增殖后收集尿囊膜毒、尿囊液毒：卵黄液毒和胚体毒，再分别接种卵黄囊，以胚体毒致死鸡胚的时问最短，尿囊膜毒致死鸡胚的时间最长；病毒经氯仿处理后接种卵黄囊，鸡胚死亡时间比未经氯仿处理的对照组推迟15h，说明病毒对氯仿具有一定的敏感性；病毒经卵黄囊、尿囊腔和尿囊膜3种途径接种鸡胚，最早死亡时间分别为51h、53h和56h。将ARV鸡胚毒分别用50％饱和(Nm)S04沉淀、10％PEG6000沉淀和差速离心纯化，测得蛋白含量分别为8．699mg／ml、17．684rag／m

4、[和5．35mg／ml，其中，前2种方法杂蛋白含量相对较高。差速离心的样品，电镜下观察到了大量规则排列的病毒粒子，无囊膜，有双层衣壳，直径约为75rim。以差速离心纯化的病毒作为包被抗原，建立了检测ARV抗体的间接ELISA方法，确定了抗原最佳包被浓度为252¨g／ml，1％BSA封闭1．5h，血清最佳工作浓度为1：160，3733反应1．5h，酶标兔抗鸡的稀释度为1：5000，37℃作用lh，底物37℃作用15min。特异性试验结果表明，NDV、IBDV、支原体的阳性血清OD值均小于ARV阴阳性血清的临界值，与抗原没有交叉反应；未加ARV抗原阻断的对照ARV阳性血清的OD值大于抗

5、原阻断的阳性血清的OD值，而加ARV抗原阻断的各稀释度的阴性血清OD值较接近；人工感染鸡在接种ARV鸡胚毒7d、15d、20d和25d用间接ELISA进行抗体检测，均能检出血清抗体阳性，能检出血清的最高稀释倍数为1：640，比对照试验具有更高的敏感性。关键词：鸡病毒性关节炎病毒；培养；间接ELISA；抗体2四川农业大学硕士毕业论文StudiesonthepropagationcharacteristicofAvianviralarthritisvirus(ARV)anddetectionofantibodyagainstARVbyindirectELISAChenyuankunPr

6、eventiveVeterinaryMedicineDirectedbyProfiWjnXintianDirectedbyAssociateProf．Cat)Saniie(LaboratoryofAnimalInfectiousDiseaseandMicroarray；SichuanAgriculturalUniversity,Ya’aIl，Sichuan625014)AbstraetThisstudyresearchedthepropagationofAvonviralar珐riHsvirus(ARV)inchikenembryo，anddevelopedanindirectEL

7、ISAtodetecttheantibodyagainstARV，whichlaidthefoundationoftheisolatingandidentificationofthepathogen,thediagnosismethodandinvestigationofepidemiology．membryo，yolksacflnid，ailantoicfluidandallantoicvesiclewerecollectedfromdeadembwoinfecte