鸡病毒性关节炎病毒增殖特性与间接elisa抗体检测方法的建

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1、鸡病毒性关节炎病毒增殖特性与间接ELISA抗体检测方法的建立研究预防兽医学：陈元坤指导教师：文心田教授本研究对鸡病毒性关节炎病毒(ARV)鸡胚增殖特性进行了探索，建立了检测该病抗体的间接ELISA方法，为开展该病的病原分离鉴定、疫病诊断和流行病学调查奠定了基础。种毒经鸡胚增殖后收集尿囊膜毒、尿囊液毒、卵黄液毒和胚体毒，再分别接种卵黄囊，以胚体毒致死鸡胚的时间最短。病毒经氯仿处理后接种卵黄囊，鸡胚死亡时间比未经氯仿处理的对照组推迟15h。病毒经卵黄囊、尿囊腔和尿囊膜3种途径接种鸡胚，最早死亡时间分别为51h、53h和56

2、h。将ARV鸡胚毒分别用50％饱和(NH4)SO4沉淀、10％PEG6000沉淀和差速离心纯化，测得蛋白含量分别为8.699mg/ml、17.684mg/ml和5.35mg/ml。差速离心的样品，电镜下观察到了大量规则排列的病毒粒子，无囊膜，有双层衣壳，直径约为75nm。以差速离心纯化的病毒作为包被抗原，建立了检测ARV抗体的间接ELISA方法，确定了抗原最佳包被浓度为252µg/ml，血清最佳工作浓度为1:160，37℃反应1.5h，酶标兔抗鸡的稀释度为1:5000，37℃作用1h，以1％BSA封闭1.5h，底物37

3、℃作用15min。人工感染鸡在接种ARV鸡胚毒7d、15d、20d和25d用间接ELISA进行抗体检测，均能检出血清抗体阳性，比对照试验具有更高的敏感性。关键词：鸡病毒性关节炎病毒；培养；间接ELISA；抗体