检测鸡黄病毒血清抗体间接ELISA方法的建立与应用.pdf

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1、中国动物传染病学报2012，20(6)：23—28ChineseJournalofAnimalInfectiousDiseases·研究论文·检测鸡黄病毒血清抗体间接ELISA方法的建立与应用施少华，傅光华L，程龙飞，王建，陈红梅，万春和L，胡思科。，宋秀梅，黄瑜(1．福建省农业科学院畜牧兽医研究所，福州350013；2．福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心，福州350013；3．天津市中升挑战生物工程有限公司，天津300380)摘要：本研究以鸡黄病毒FQ—C1株为包被抗原，建立检测鸡黄病毒血清抗体的间接ELISA方法。经优化后确定其最佳工作条件为每孔包被抗原0

2、．57g，血清以1：640倍稀释，羊抗鸡IgG酶标抗体以1：3200稀释，显色10min后读取OD450值，P／N值2．1的血清为阳性。本实验所建立的诊断方法敏感性高于血清中和试验。对849份来自福建的血清样品进行检测表明，鸡黄病毒的血清阳性率达33．1％，说明鸡黄病毒感染有一定的流行性。关键词：鸡黄病毒；间接ELISA；血清抗体中图分类号：$852．659．6文献标识码：A文章编号：1674．6422(2012)06．0023．06DEVELoPMENToFANINDIRECTELISAFoRDETECTIoNoFSERUMANTIBoDYToCHICKEN

3、FLAVIVIRUSSHIShao—hua，，FUGuang．hua，，CHENGLong．fei，，WANGJian，CHENHong—mei，，WANChun—he，HUSi．ke。，SONGXiu．mei，HUANGYu’(1．InstituteofAnimalHusbandryandVeterinaryMedicine，FianAcademyofAgriculturalSciences，Fuzhou350013．China,"2．FujianAnimalDiseasesControlTechnologyDevelopmentCenter,Fuzhou3

4、50013,China；3．T吩inZhongshengTiaozhanBiologicalEngineeringInc．，~awin300380,China)Abstract：Anindirectenzyme．1inkedimmuosorbentassayfELISA1wasdevelopedtodetectserumantibodiestochickenflavivirus．TheELISAplateswerecoatedwithchickenflavivirusFQ—C1strain．Theworkingparameterswereoptimizedto

5、be0．57ggcoatingantigenin100gLperwell，testserumdilutionat1：640andHRP—labeledgoatanti—chickenIgGat1：3200．After10minutesofcolordevelopmentwithtetramethylbenzidine(TMB)substrate，athresholdofpositive／negativesignalratio(P／N)2．1wasdeterminedasapositivesample．TheELISAmethodwasshowntobemore

6、sensitivethanserumneutralization．Atotalof849chickenserumsamplescollectedfromFujianprovinceweretestedinindirectELISAand284samples(33．1％)werepositive，indicatingthatflaviviruswasprevalentinchickenflocksinFujianprovince．Keywords：Chickenflavivirus；indirectELISA；serulTlantibody收稿日期：2012-0

7、9-06基金项目：福建省省属公益类项目(2011R1025—8)(2011R1025—2)；现代农业产业技术体系建设专项资金(CARS一43)；福建省“种业创新与产业化工程建设项目”(2011FJZY一9)作者简介：施少华，男，博士，副研究员，主要从事兽医微生物学研究通信作者：黄瑜，E—mail：huangyu_815@163．corn中国动物传染病学报2012年11月自2010年4月，一种引起的种(蛋)鸭产蛋心2h，弃上清后沉淀用灭菌PBS重悬，得到病毒骤降的新发疫病在中国浙江省、河北省、福建省、浓缩液，储存于一70℃。抗原的纯化是通过蔗糖梯山东省等相继发生

8、，可致使产蛋鸭采食量迅速下度离心及超速