抗卡那霉素单克隆抗体细胞株的筛选及间接ELISA法的建立.pdf

《抗卡那霉素单克隆抗体细胞株的筛选及间接ELISA法的建立.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、华北农学报·2010，25(2)：121-124抗卡那霉素单克隆抗体细胞株的筛选及间接ELISA法的建立齐红莉，杨广，刘金兰(天津农学院水产科学系，天津市水产生态及养殖重点实验室，天津300384)摘要：采用碳二亚胺(EDC)法合成卡那霉素完全抗原，免疫BALB／c小鼠，通过杂交瘤技术获得3株能稳定分泌抗卡那霉素单克隆抗体的杂交瘤(5D7、6H8、7G4)。选择其中的5D7株抗体，经ELISA鉴定，细胞上清的效价达10’以上，腹水效价达到5x10以上；建立了间接竞争ELISA法，通过优化，其检测限为0．5ng／mL，抗体Ic。为3．7as／mL，与妥布霉素交叉反应率为63．8％，与其他抗生素无

2、交叉。可见ELISA具有快速、敏感、特异、简便等特点，适合于KAN残留的快速检测，具有较高的推广应用价值。关键词：卡那霉素；单克隆抗体；ELISA中图分类号：Q813．2文献标识码：A文章编号：1000—7091(2010)02—0121—04StudyonPreparationofMonoclonalAntibodiesAgainstKanamycinandDevelopmentofIndirectCompetitiveInhibitionELISAQIHong-li，YANGGuang，LIUJin-lan(DepartmentofFisheryScience，TianjinAgricul

3、turalUniversity，KeyLaboratoryofAquaticEcologyandAquacultureofTianjin，Tianjin300384，China)Abstract：TheantigenofkanamycinsynthesizedbyEDCreactionwasusedforpreparationofahybridomacellline．whichsecretesmonoclonalantibodiesagainstkanamycin．Thetitersofantibodyincellsupematantandasciteswere1：10’and1：5×10．r

4、espectively．AcompetiveELISAtestwasdevelopedwithanti-KANmonoclonalantibodyandthesensibivityof0．5ng／mL，theIC50of3．7ng／mL．Theantibodyagainstkanamycinwasselectivetowardtobra-mycinwithcross-reactivityofabout63．8％，and，wasntdetectivecross-reactivitytowardothers．TheELISArapidity，sensitivity，specificityandbr

5、iefnessandwasprovedtobeusedintherapidtestofKANresiduesinanimalfood．Keywords：Kanamycin；Monoclonalantibody；ELISA氨基糖苷类药物是含有氨基糖分子的一类抗生出口禽肉的卫生质量和食品安全，国家质量监督检素，主要包括链霉素(Streptomycin，STR)、庆大霉素验检疫局2002年第37号文件中规定了禁用药物和(Gentamicin，GEN)、新霉素(Neomycin，NEO)、新霉允许使用药物，其中，卡那霉素最大残留限量为：鸡胺(Neamine，NEA)、卡那霉素(Kanamycin，KA

6、N)和肉100ng／g，肝300ng／g。妥布霉素(Tobramycin，TOB)等，此类药物为广谱抗国内外学者对KAN的残留检测方法进行了大菌药物，能有效抑制细菌生长与繁殖，对大多数革兰量研究，建立了微生物法、气相色谱(GC)、高效液相氏阳性菌和革兰氏阴性菌都具有显著的抗菌效果，色谱(HPLC)、气一质联用(GC-MS)、液一质联用是我国农牧业和水产业常用的兽药之一，也常被添(HPLC／MS)等方法，这些方法均具有所需仪器昂加到饲料中促进动物的生长发育。但此类药物的耳贵、样品前处理复杂、繁琐费时、不能现场操作等缺毒性和肾毒性较为严重¨。，因此，其在动物性产品陷。因此，建立一种简便易行的KAN

7、检测方法中的残留问题也日益引起人们的关注。为保证我国具有重要意义。ELISA法具有灵敏、快速、特异性收稿日期：2009—11一O1基金项目：天津市科委基础研究项目(07JCYBJ11800)作者简介：齐红莉(1978～)，女，辽宁沈阳人，讲师，硕士，主要从事鱼类生理和免疫生化方面的研究。通讯作者：刘金兰(1966～)，女，湖南衡阳人，教授，硕士，主要从事水产动物养殖与病害防治方面的研究。nCT-一