食蟹猴血浆中TNF-α单克隆抗体间接ELISA检测法的建立-论文.pdf

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1、药物分析杂志ChinJPharmAnal2014，34(9)食蟹猴血浆中TNF一单克隆抗体间接ELISA检测法的建立孙旭，闻镍，吴杰青，于敏，汤瑶，李佐刚(中国食品药品检定研究院食品药品安全评价研究所药物代谢动力学实验室，北京100176)摘要目的：建立检测食蟹猴血浆中TNF—单克隆抗体的间接ELISA检测方法。方法：利用包被抗原TNF一及酶标抗体山羊抗人IgG—HRP构建TNF—d单克隆抗体的ELISA检测试剂盒，并进行方法学验证。结果：间接ELISA法检测抗TNF一抗体的最低检出限为0．2ng·mL～；最低定量限为0．5ng·mL

2、～；浓度0．5～200ng·mL范围内线性良好。日内、日间回收率分别为85．5％～95．O％和85．3％～94．0％；日内、日问精密度分别为4．6％～15．0％和1．1％～8．0％。结论：本实验成功建立了TNF一单克隆抗体的间接ELISA检测方法，可用于食蟹猴血浆中TNF—Ot单克隆抗体的含量测定。关键词：肿瘤坏死因子O／；TNF一单克隆抗体；间接酶联免疫吸附法；食蟹猴血浆样品中图分类号：R917文献标识码：A文章编号：0254—1793(2014)09—1553—03EstablishmentofindirectELISAforde

3、tectingTNF一monoclonalantibodyinplasmaofmachinSUNXu，WENNie，WUJie—qing，YUMin，TANGYao，LIZuo—gang(LaboratoryofDrugMetabolismandPharmacokineties，InstituteforFoodandDrugSafetyEvaluationNationalInstitutesforFoodandDrugControl，Bering100176，China)AbstractObe：Toestablishanindirec

4、tELISAdetectionmethodforTNF一仪monoclonalantibodyinplasma．iectiv—ofmachinMethodAnindirectELISAkitwasbuiltbyutilizingtheant—TNFmonoclonalantibodyandgoat．：ianti—humanIgG—HRP，whichwasusedasacoatingantibodyandadetectingantibodyrespectively．Methodologyvalidationswereperformedf

5、orthemethod．Results：ThedetectionlimitforTNF—Olwas0．2ng·mL～；thelimitofquantificationwas0．5ng·mL一：thestandardcurveofestablishedELISAⅥaslinearbetween0．5and200ng·mL_。．Inter—dayaccuracyandintra—dayaccuracywere85．5％一95．0％．85．3％一94．0％．respectively．Inter—dayprecisionandintra—da

6、yprecisionwere4．6％一15．0％．1．1％一8．0％．respectively．Conclusion：AnindirectELISAisdeveloped．providingausefultoolforquantifyingthelevelofTNF—inplasmaofmachin．Keywords：tumornecrosisfactor；TNF—OLmonoclonalantibody；indirectELISA；machinplasmasample肿瘤坏死因子(tumornecrosisfactor，平，目前已成

7、为许多炎性疾病如类风湿性关节炎、银TNF一)是迄今发现的抗肿瘤活性最强的细胞因屑病、克罗恩病等的治疗药物[5]，是国内外研究热子。对肿瘤细胞具有直接的抑制作用和细胞杀死点。本研究利用包被抗原TNF—及酶标抗体山羊作用，不影响正常细胞的生长、分化和代谢功抗人IgG—HRP建立了间接酶联免疫吸附法(en．能1]。然而，TNF—过度表达确是体内炎症反应zymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)检测食蟹的重要因素之一。在许多疾病的病理生理过程中猴血浆中抗TNF一单克隆抗体的方法，具有特异起着重要的作用，参与了类风湿

8、关节炎、Crohn病、性强、灵敏度高、快速且易操作等特点，为TNF—强直性脊柱炎、自身免疫性心肌炎、银屑病关节单克隆抗体的研究及临床应用提供了药学基础。炎、糖尿病、多发硬化症等许多自身免疫性疾病的1材料与仪器发生、发展I