抗牛血清IgG单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定.pdf

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1、18微生物学免疫学进展2011年第39卷第3期ProginMicrobiolImmunolSep.2011，Vol.39No.3抗牛血清I�G单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定*王平，周志军，施金荣，朱华松，余模松(武汉生物制品研究所，武汉430060)摘要:用牛血清IgG免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合，用含山羊血清的培养基培养细胞，上清用间接ELISA法筛选�获得4株能稳定分泌抗牛血清IgG的单克隆抗体杂交瘤细胞株，分别命名-5为1G5�2A8�3F5�4C5�其中2A8为IgG2a，其余3株为IgG1;腹水单抗的ELISA滴度均超过10;除3

2、F5株单抗与山羊血清有交叉反应外，1G5�2A8�4C5株与人�马�猪�羊�兔�豚鼠等血清均不发生交叉反应;4株单抗与制备病毒性疫苗的基质液呈阴性反应;4株单抗识别分子量为160kD的牛血清IgG的两个不同抗原表位;4株单抗相对亲和力大小依次为4C5>2A8>1G5>3F5，相对敏感度依次为2A8>4C5>3F5>1G5;4株杂交瘤细胞株的染色体计数均大于90条，连续培养三个月以及冷冻保存半年后复苏，细胞生长良好�使用这些单抗建立的双抗体夹心法检测生物制品中的残留牛血清IgG�关键词:牛血清IgG;筛选;单克隆抗体;酶联免疫吸附试验中图分类号:Q813.2文献标识码:A文章编号:1

3、005-5673(2011)03-0018-06P���a�a����a�dc�a�ac�����a��������b��d��a���c����������c���a�a���b�d���a�a����b����������I�GWANGP���，�HOU���-��，SHIJ��-����，����.(W����I����������B���������P�������，W����430060，C����)Ab���ac�:ThemonoclonalantibodiesagainstbovineserumIgGwerepreparedbyfusionofthebovineIgG

4、immuni�edBALB/cmouse’sspleencellswithSP2/0myelomacells，thefusioncellswereculturedbytheculturemediumcontaininggoatsera，thesupernatantswerescreenedbyanindirect-ELISA.Fourhybridomacelllinessecretinganti-bovineIgGMcAbswereestablishedandnamedas1G5�2A8�3F5�4C5.ByanalysisofIgsubclass，the1G5，3F5，4C5ar

5、eclassifiedasIgG1，-5andthe2A8asIgG2a.McAbstitersoftheascitesoffourhybridomalineswereover10.ThefourMcAbsshowedhighspecificitytobovineIgGandnocross-reactivitytoseraglobulinsfromhuman，horse，swine，goat，rabbit，guineapigandotheranimals，exceptthat3F5hadahighreactivitytogoatserumIgG.Theycanrecogni�etw

6、odifferentepitopesof160kDonthebovineIgGmolecule.Theordersoftheirrelativeaffinityare4C5>2A8>1G5>3F5andtheorderoftheirrelativesensitivityare2A8>4C5>3F5>1G5.Eachofthesehybridomaswithchromosomenumbersofover90wasprovedtobeca-pableofsecretingMcAbstablyafterconsecutiveculture，cryopreservationandresus

7、citation.ThedoubleantibodysandwichELISAwasdevelopedbyusingtheseMcAbstodetecttheresidualbovineIgGinpreparationofbiologicalproducts.K�����d�:BovineserumIgG;Screening;Monoclonalantibody(McAb);ELISA［2］小牛血清是各种疫苗生产中细胞培养的重要原残留量与白蛋白含量接近�由于疫苗中的牛