分泌抗鸡新城疫病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用

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1、河南农业大学硕士学位论文分泌抗鸡新城疫病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用姓名：巩霞申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：王川庆20030601致谢本文是凌尊敬黪导努王矧庆教授、张改乎褥究爨豹悉心揍导帮9璎母苏裁女±、扬燕燕副研究髓的亲切关怀下究成的。三年来，几位恩师在学习、工作和生活上给予我无徽不至的荚怀，愚筛高尚的思想修养，渊博的知谈，严谨的治学态度，开籀翻新的糖享孛，热情德入、严予律己的生活原则，正童箍富有感染力的人格，将锼我终生受益。值此论文付印之际，谨向各位恩师致以崇高的敬意和最衷心

2、的感谢!本礴究ji嚣溺露农辩院垒谚技术磷究室所承撵静湾鸯省熬大稀投浚关王耍瓣《重丈畜禽疫病快速诊断技术的研究》的部分内容，受该室邀请，大部分工作是在河南农科院所完成的。在此期间，河南新乡职渡技术师范学院的王选年博士给予了大量的指导，褥裂了李学缀、秘燕燕、凑悫军、邓璇广、攀毒撵等老瘘大爨颦动，李灵霞老爨、至建中老师、邢广旭、赵东、杨继飞、柴书军同志及中心实验室的郅玉淀、易明林老师，河南西奚宝秘公司的康晓笛经理也为试验的顺利进行提供了煞情的帮助。在就，一并囱他们表示袭心的感谢!感谢本组尹风阁教授、卢中华教授、

3、崔保安教授、王泽霖教授、李文刚教授、宁长率教授、张菇蠛博±静教诲帮关悔，还簧感溱粱宏德教授耱教诲器帮蓟j向哺育和培养我的母校和传授我知识的全体老师致以崇高的敬意，向校研究生处、院党总支、院行政的领姆和老师们表示畿心的感谢!感滚本黛志文牮、刘红葵老露及舞婊孛骥疆、痨弟罗羧、嚣洪涛、皇蠢秘乎、扬俊兴、乔宏兴、张华、杨智洪、杜根成给予的无私帮助!感谢黄嫡、支fj岩、朱沙、胡涛、铷红亮、赵朴、郑杰以及所有给予我支持和帮助t、豹OO级其学们!感谢我的父母双亲、爱人冯杰和所有亲人，感谢他们为我的求学之路做出的巨大稻畿

4、稻奉献{感谢所谢曾经给予我关心和帮助的人们，我所取得豹一切进步都归功于您们!塑要查些奎兰!!塑星堡圭堡苎摘要经一次差速离心分别提取鸡胚尿囊液中的F。8E8和N一79株鸡新城疫病毒(Nov)，获得纯化抗原。用该纯化抗原加弗氏佐剂免疫Balb／c小鼠，取免疫鼠脾细胞和NS0骨髓瘤细胞用聚乙二醇(eE64000)作细胞融合，经有限稀释法克隆和亚克隆，获得1株能稳定分泌抗NDV特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为FGl。经鉴定该杂交瘤细胞的平均染色体数为93．7条，杂交瘤细胞上清和腹水单克隆抗体的ELISA效价

5、分别为l：512和l：64000。经Western—blotting证明单抗FGl针对NDV分子量为63KD的HN蛋白，且具有血凝抑制活性。FGI杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体与鸡法氏囊病毒、鸡喉气管炎病毒、鸡支气管炎病毒，鸡减蛋综合征病毒，鸡流感病毒均不发生交叉反应，有良好特异性。连续传代20次，5个月内冻存、复苏3次，FG!杂交瘤细胞株仍能稳定分泌抗体。利用FGl杂交瘤细胞株的小鼠腹水单抗建立了单抗介导的、检测NDV的双抗体夹心ELISA。经测定，兔抗NDV高免血清的最佳包被浓度为1：1600，酶标单抗

6、(I-IPa,．McAb)的最佳工作浓度为1：200，其检测灵敏度为300ng／ml。所建立的双抗体夹心ELISA对NDV的检测是特异性的，与其它禽病病原不反应，能很好的对NDV进行定性检测，并具有较高的灵敏度。该方法尚需进～步研究、改进，并结合金标免疫层析做成试纸条，以用于生产实践中NDV的快速诊断。关键词：鸡新城疫病毒；单克隆抗体；杂交瘤；单抗夹心．ELISA塑堕查些查堂!!!!星堡圭堡皇文献综述1新城疫概述1．1新城疫的流行概况新城疫(Newcastledisease，NO)是由新城疫病毒(Newc

7、astlediseasevirUS，NDV)引起的鸡和火鸡的一种急性、高度接触性、致死性传染病。NDV属于副粘病毒科副粘病毒亚科腮腺炎病毒属禽副粘病毒血清I型病毒(APMV-I)。ND的典型症状为呼吸困难、下痢、神经系统紊乱、粘膜和浆膜出血，病禽常呈败血症经过。该病在鸡、火鸡、鸽、鹌鹑和数种其它鸟类中能引起100％发病和死亡“_4“。本病在世界上几乎所有养鸡国家和地区都有发生，给许多国家的养鸡业造成了巨大的经济损失，是危害养鸡业最严重的疫病之一。正是由于该病的危害和引发的后果极其严重，ND被国际兽疫局(O

8、IE)列为A类疫病。新城疫于1926年首次暴发于印度尼西亚的爪哇”1和英国的新城地区”1。1927年Doyle证明其病原为一种病毒，并命名为新城疫病毒哺’“，1926年之前，在中欧即有类似于新城疫性疾病的报告嘲。Levin眦引证0chi和Hashimto的报告，认为早在1924年朝鲜就可能已存在此病。我国于1935年首次报道此病，当时认为是真性鸡瘟，1948年证实为新城疫“01。回顾历史，ND在世界上曾有过三次大流行，第一次是