新城疫病毒单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立.pdf

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1、第45卷第4期河南农业大学学报V01．45No．42011年8月JournalofHenanAgriculturalUniversityAug．2011文章编号：1000—2340(2011)04—0428—04新城疫病毒单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立赵坤，李任峰，赵朴，赵恒章，常新耀(河南科技学院动物科学学院，河南新乡453003)摘要：将复性的重组NDVHN蛋白免疫BALB／c小鼠的脾细胞与SP2／O骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤．通过ELISA筛选，获得了1株稳定分泌抗HN单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞4El1．ELISA和Western—blot结

2、果表明，该MAb能与NDV特异性反应，而不与H9亚型AIV，IBDV，EDS76，IBV和CIAV交叉反应．利用该MAb和抗NDV多克隆抗体IgG建立了双抗体夹心ELISA．试验结果表明该DAS·ELISA检测NDV的敏感性可达8个血凝单位．关键词：新城疫病毒；单克隆抗体；ELISA中图分类号：$852文献标志码：ADevelopmentofmonoclonalantibodyagainstNDVandestablishment0fELISAdetectionmethodZHAOKun，LIRen—feng，ZHAOPu，ZHAOHeng—zhang，CHANGX

3、in—yao(DepartmentofAnimalScienceandTechnology，HenanInstituteofScienceandTechnology，Xinxiang453003，China)Abstract：BALB／cmicewereimmunizedwiththerecombinantHNproteinOtNDV．HybridomaswasgeneratedbythefusionofthespleenocytesfromthesemicewithSP2／0myelomacells．HybridomacellswerescreenedbyELI

4、SA．Onehybridomacell1ine(4El1)stableinsecretinganti．HNmonoclonalantibodies(MAb)wasgenerated．SpecificityoftheMAbswasidentifiedbyELISAandWesternblot．TheresultsshowedthattheMAbcanspecificallyreactwithNDVwithoutcross—reactivitytoH9-AIV，IBDV，EDS76，IBVandCIAV．DoubleantibodysandwichELISA(DAS—

5、ELISA)usingtheMAbandanti—NDVIgGpolyclonalantibodywasdeveloped．Experimentalresultsprovedthat8hemagglutinationunits(HAU)ofNDVcanbedetectedbytheDAS—ELISA．ItishelpfulforpromotingdetectionassayandpathogenesisstudiesonNDV．Keywords：NDV；monoclonalantibodies；ELISA鸡新城疫(NewcastleDisease，ND)是由新城疫

6、随着对NDV蛋白分子结构和功能研究的深入，人病毒(NewcastleDiseaseVirus，NDV)引起禽类的一们发现其与致病性的关系及强中弱毒株之间分子种以呼吸道、消化道粘膜出血为典型病变的高度接结构差异，为ND在分子水平上的特异性诊断奠定触性、急性败血性传染病．常呈败血症经过，主要特了坚实的理论基础．目前已有研究人员将分子技术征是呼吸困难、下痢、神经机能紊乱、粘膜和浆膜出运用在NDV检测方面．这些技术既能对NDV血，是危害世界养禽业的最严重的传染病之一⋯．进行检测、特性研究、鉴定及致病型确定等，又能对收稿13期：2011一O1—11基金项目：河南省基础与前沿

7、技术研究计划项目(072300430020)作者简介：赵坤，1968年生，男，河南南阳人，副教授，博士，主要从事动物传染病防治研究第4期赵坤等：新城疫病毒单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立429病毒的流行及来源进行追踪．为研究NDV抗原基1．5腹水抗体的制备因变异与病毒抗原变异的关系，作者制备并鉴定了取4只经产BALB／c雌性小鼠，腹腔注入无菌抗NDV的特异性单克隆抗体，并应用该单抗对液体石蜡进行预处理，0．5mL·只～．10d后，取NDV进行了检测．对数生长的杂交瘤细胞，用无血清1640基础培养基调整细胞数量1×10个·mL～，每只小鼠腹腔1材料与方法注

8、入0．5m