犬瘟热病毒单克隆抗体夹心ELISA检测方法的建立.pdf

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1、第35卷第8期中国预防兽医学报Vo1．35．No．82013年8月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineAug．2013doi：10．39698．issn．1008—0589．2013．08．08犬瘟热病毒单克隆抗体夹心ELISA检测方法的建立孙婧，一，毕振威，夏兴霞，王晓丽，诸玉梅，董晨红，贾红，朱瑞良，王永山(1．山东农业大学动物科技学院，山东泰安271018；2．江苏省农业科学院兽医研究所／农业部兽用生物制品工程技术重点实验室，江苏南京210014；3．中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京100193)摘要

2、：为建立方便快捷的犬瘟热病毒(CDv)检测方法，本实验应用杂交瘤细胞融合技术，建立了4株分泌抗CDV单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株，分别命名为A2、F7、H4和G12。相加ELISA试验显示4株MAb作用于CDV不同的抗原表位。选取相加指数较高的两株MAbG12和A2分别作为捕获抗体和酶标检测抗体，建立检测CDV的夹心ELISA检测方法，并对实验条件进行了优化。结果显示，该方法与犬细小病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒1型、犬冠状病毒等犬类病毒无交叉反应，敏感度为5i*g／mL，变异系数小于6％。利用该方法与RT．PCR方法同时检测57份临床样品，两种方法的符合率为

3、100％。本实验建立的MAb夹心ELISA方法具有特异、敏感、方便快捷等优点，适用于大批量临床样品检测。关键词：犬瘟热病毒；杂交瘤细胞株；单克隆抗体；夹心ELISA中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：1008—0589(2013)08．0635．05DevelopmentofasandwichELISAbasedonmonoclonalantibodiesagainstcaninedistempervirusSUNJing，BIZhen-wei，XLXing-xia，WANGXiao—li，ZHUYu—mei，DONGChen-hong2，JIAHo

4、ng，ZHUR_ui—liang，WANGYong-shan(1．CollegeofAnimalScienceandTechnology，ShandongAgriculturalUniversity，Tai’an271018，China；2．KeyLaboratoryofVeterinaryBiologicalEngineeringandTechnology，MinistryofAgricultural，InstituteofVeterinaryMedicine，JiangsuAcademyofAgriculturalSciencesNanjing210014，C

5、hina；3．InstituteofAnimalSciences，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Beijing100193，China)Abstract：Todevelopamethodforthedetectionofcaninedistempervirus(CDV)，fourhybridomaofA2，F7，H4andG12secretingmonoclonalantibodies(MAb)toCDVwerepreparedbythefusionofSP2／0cellsandsplenocytefromBALB／Cm

6、iceimmunizedwiththepurifiedCDV．AdditivityELISArevealedthatthefourMAbsrecognizedspatiallyindependentepitopesofCDV．Inaddition，asandwichELISAwasestablishedwithMAbG12ascaptureantibodyandHRPconjugatedMAbA2asdetectionantibodyfortherapiddetectionofCDVwhichhadnocross—reactivitywithothercanine

7、virusandthedetectionlimitwas5~g／mL．Thecoeficientofvariationofreproducibilitywaslessthan6％．Atotalof57clinicalsamplesweredetectedbytheELISAandRT—PCRwithafeementrateof100％．TheresultindicatedthatthesandwichELISAwasapplicabletotheclinicaldetectionofCDV．Keywords：caninedistempervirus；hybrido

8、ma；mo