犬瘟热病毒单抗夹心ELISA检测方法的建立.pdf

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1、第32卷第4期扬州大学学报(农业与生命科学版)V�l.32N�.42011年12月J����al��f�Ya�g�h���U�i�e��i��(Ag�ic�l���al�a�d�Life�Scie�ce�Edi�i��)Dec.2011犬瘟热病毒单抗夹心ELISA检测方法的建立张�鸿1�胡传莉2�贺生中1�李�玲1�朱善元1�翟晓虎1(1.江苏畜牧兽医职业技术学院�江苏泰州225300�2.江苏省东海县畜牧兽医站�江苏东海222300)摘�要�以2株犬瘟热病毒(CDV)特异性单克隆抗体2H11和1G7为基础建立了检测CDV的单抗夹心ELISA方法�用单抗2H11作

2、为捕获抗体�以辣根过氧化物酶(HRP)标记的单抗1G7为检测抗体�通过方阵试验确定2H11和1G7--1�建立的单抗夹心ELISA方法具有良好的特异性�与纯化的犬细小HRP的最佳工作浓度分别为200和475�g�mL病毒(CPV)无交叉反应�对纯化的CDV最小检出浓度为0.01�mL-1�采集经CDV抗原快速检测试纸条检测为阳�g性的40份疑似感染犬样品和检测为阴性的18份对照犬样品�分别用单抗夹心ELISA法和套式PCR法(N-PCR)进行同步检测�结果表明�单抗夹心ELISA法敏感性接近于N-PCR法�两种方法的符合率为85%�关键词�犬瘟热病毒�双抗体夹心E

3、LISA�单克隆抗体中图分类号�S�855.3�����文献标志码�A�����文章编号�1671-4652(2011)04-0015-04E��ab������������a��a�d��c��ELISA�����d���c��������ca����d���������������ba��d��������c���a��a���b�d���1�HU�C��a�-���HE�S����-�����1�LI�L���1�ZHU�S�a�-��a�1�ZHAI�X�a�-��1ZHANG�H���(1.J�������A����H��������V���C����T

4、ai�h���225300�Chi�a�2.D�������A����H�������V���S���D��ghai�222300�Chi�a)ABSTRACT�A��a�d�ich�ELISA�ba�ed����m���cl��al�a��ib�die�(mAb)f����a�id�diag���i���f�ca�i�e�di��em�e���i���(CDV)�a��e��abli�hed.The�ELISA��a����a�da�di�ed�b���ai�-ma�chi�g�e��e�ime���a�d��he����ki�g�c��ce���a�i����

5、�f�he�mAb�2H11a�d�HRP-c��j�ga�ed�mAb�1G7�e�e�200a�d�475�g�mL-1��e��ec�i�el�.The�e��a�����c������eac�i�i���i�h�ca�i�e��a����i���(CPV)a�d��he�mi�im�m�de�ec�i���limi���a��0.01�g�mL-1��f����ified�CDV�a��ige��b���he�e��ab-li�hed�ELISA.40���i�i�e��am�le��a�d�18�ega�i�e��am�le��de�ec�ed�b���

6、�lid��ha�e�ch��ma��g�a�hic�imm���a��a���e�e�e��ed��i�h�ELISA�a�d��e��ed-PCR(N-PCR).The��e��l����h��ed��ha���he��e��i�i�i����f�ELISA��a���imila�����N-PCR��i�h�85%ag�eeme����f��he�����me�h�d�.KEY�WORDS�ca�i�e�di��em�e���i�����a�d�ich�ELISA�m���cl��al�a��ib�d�犬瘟热是由犬瘟热病毒(CDV)引起的一种犬类高度接触性传

7、染病�临床症状以双相热�皮疹�白细胞减少�胃肠炎�结膜炎及神经症状为特征�可导致高发病率和病死率�对犬�貂�狐等动物的危害很�1��2��3�大�目前�检测CDV的方法包括病毒分离与鉴定�反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)�荧光抗体�4��酶联免疫吸附试验(ELISA)�5-7��8�技术和胶体金免疫层析技术等�其中ELISA具有敏感性高�特异�5-7�9-11�性强�操作简便和能够定量测定等优点�本研究在前期制备抗CDV单克隆抗体的基础上�建立了CDV单抗夹心ELISA检测方法�以满足犬瘟热临床诊断的需要�1�材料与方法1.1�试验材料CDV�O�de���e

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