蓝舌病病毒重组VP7蛋白单克隆抗体制备及竞争ELISA检测方法的建立.pdf

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1、第34卷第5期中国预防兽医学报Vo1．34．NO．52012年5月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineMav．2012doi：10．3969~．issn．1008—0589．2012．05．12蓝舌病病毒重组VP7蛋白单克隆抗体制备及竞争ELISA检测方法的建立耿宏伟1,2,3，秦永丽，李俊平，杨涛，孙恩成，刘霓红，白安斌，徐青元，王凌凤，赵晶z，覃绍敏，林俊5，郭怡蹯3，吴东来，2(1．东北农业大学动物医学学院，黑龙江哈尔滨150030；2．

2、中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／农业部兽医公共卫生重点开放实验室，黑龙江哈尔滨150001；3．黑龙江省农业科学院，黑龙江哈尔滨150086；4．广西兽医研究所，广西南宁530001；5．广西大学，广西南宁530004)摘要：为了建立蓝舌病(BT)的血清学诊断方法，本研究利用原核表达的蓝舌病病毒(BTV)a~-清型12型vP7纯化蛋白免疫BALB／c小鼠，制备2株单克隆抗体(MAb)，分别命名为BTV一2D10和BTv一4H7。IFA试验表明，2株MAb均能与BTV24

3、个血清型发生特异性反应，而与茨城病病毒(IBAV)、中山病病毒(cv)、赤羽病病毒(AKAV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛轮状病毒(BRV)、牛肠道病毒(BEV)、牛呼肠孤病毒(RV)及口蹄疫病毒(FMDV)~L交叉反应，表明2株MAb均为BTV群特异性抗体。采用重组表达的VP7蛋白作为包被抗原建立的竞争ELISA方法证明，BTV．4H7MAb对不同血清型BTv阳性血清具有良好的阻断效果，而对AKAV、IBAV、BRV和FMDV阳性血清无阻断作用。本研究建

4、立的竞争ELISA方法与IDEXX公司的试剂盒检测包括65份已知背景血清和322份采自广西省的山羊血清样品，检测结果符合率分别达100％和98％。该竞争ELISA方法的建立为BTV抗体的监测提供了安全、快速、准确的技术手段。关键词：蓝舌病病毒}重组VP7蛋白；群特异性单克隆抗体；竞争ELISA中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：1008—0589(2012)05—0388—05DevelopmentofmonocloneantibodycompetitiveELISAfordete

5、ctionofBluetonguevirusantibodiesGENGHong—wei’，QINYong-li，LIJun—ping~，YANGTao，SUNEn—cheng2，LIUNi—hong2，BAIAn—bin4，xuQing—yuan2，wANGLing—fen，zHAOJing2，QlNShao—rain，LINJun，GU0Yi—fan．ⅥUDong—lai，(1．CollegeofAnimalMedicine，NortheastAgriculturalUniversity，H

6、a~in150030，China；2．KeyLaboratoryofVeterinaryPublicHealth，MinistryofAgricultural，StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology，HarbinVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Harbin150001，China；3．HeilongiiangAcademyofAgriculturalS

7、ciences，Harbin150086，China；4．GuangxiVeterinaryResearchInstitute，Nanning530001，China；5．GuangxiUniversity，Nanning530004，China)Abstract：TodevelopmentELISAmethodfordetectingantibodiesagainstbluetonguevirus(BTV)，twomonoclonalantibodies(MAbs、againstBTV12Vl

8、P7proteinwereproducedbyfusingSP2／0myelomacellswithspleencellsofBALB／cmiceimmunizedwithpurifiedrecombinantBTV12VP7proteinandscreenedbyELISAcoatedbyBTV12．Theindirect*Correspondingauthor收稿日期：2011-07—19基金项目：国家863项目(2011AA10A212)；黑龙江省自然科学基金项目(ZJN-0602—01)