小反刍兽疫N蛋白单克隆抗体的制备及竞争ELISA方法的建立.pdf

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1、农业生物技术学报，2011年，第19卷，第5期，第967～972页JournalofAgriculturalBiotechnology，2011，Vo1．19，No．5，967～972技术改进UpdatedTechnology小反刍兽疫N蛋白单克隆抗体的制备及竞争ELISA方法的建立邱文英李伟李刚田康乐曾妮中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，动物营养学国家重点实验室，北京100193通讯作者，gli358@yahoo．com摘要小反刍兽疫(PPR)是由小反刍兽疫病毒(PPRV)~I起的一种危害严重的急性接触性传染病。为了检测血清中存在的抗PPRV的抗体，本研究利用

2、纯化后的真核表达的PPRVN蛋白重组蛋(rBacmid．PPRN)作为免疫原免疫BALB／c小鼠(Musmusculus)，并使用原核表达的PPRVN蛋白重组蛋白(rpET．PPRN)作为间接ELISA检测抗原，共筛选得到8株抗PPRVN蛋白的单克隆抗体(mAb)。其中1D5单抗腹水效价达1：10，分泌单抗亚类为IgG2b。以1D5作为竞争抗体、纯化后的rpET．PPRN蛋白作为包被抗原，建立了检Nd,反刍兽疫血清抗体的单抗竞争性ELISA(c．ELISA)方法。所建立的c—ELISA方法能够特异性的区分牛瘟阳性血清和小反刍兽疫阳性血清，并具有较高的灵敏度和特异

3、性。应用建立c—ELISA检测方法检测共129份山羊(Caprahircus)fll清样品，与标准c—ELISA试剂盒的符合率为96．9％。本研究成功地建立了可特异性检测动物血清中抗PPRV抗体的竞争性ELISA方法，对小反刍兽疫的诊断、疫苗免疫水平的监控及控制其流行具有重要意义。关键词小反刍兽疫病毒，单克隆抗体，竞争性ELISAPreparationofMonoclonalAntibodiesAgainstPestedespetitsruminantvirus(PPRV)NucleoproteinandEstablishmentofaCompetitiveEL

4、ISAfortheDetectionofPPRVAntibodiesQiuWenyingLiWeiLIGangTianKangleZengNiStateKeyLaboratoryofAnimalNutrition，BeijingInstituteofAnimalScienceandVeterinaryMedicine，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Beijing100193，ChinaCorrespondingauthor，gli358@yahoo．comDOI：1O．3969~．issn．1674—79682011．

5、05．025AbstractPestedespetitsruminants(PPR)isanacuteandhighlycontagiousdiseasecausedbyPestedespetitsruminantsvirus(PPRV)．ForthedetectionofIgGagainstPPRVinsera．BALB／cmice(Musmusculus)wereimmunizedwithpurifiedrecombinantnucleoproteinofPPRVexpressedineukaryoticexpressionsystem．Thehybrido

6、maswerescreenedbyindirectELISAusingpurifiedrecombinantnucleoproteinofPPRVexpressedinprokaryoticexpressionsystemascoatingantigen．Eightmonoclonalantibodies(mAbs)againstPPRVNproteinwerefilteredandthebestwas1D5．Isotypeofthe1D5wasIgG2b，andthetiteroftheascitesinducedbv1D5was1：1O．Acompetiti

7、veEL1SAfc-ELISA)forthedetectionofantibodiesagaistPPRVwasestablishedusingrpET—PPRNproteinascoatingantigenandmAb1D5asdetectingantibody．TheC-ELISAcoulddiferentiaterinderpest(RP)andPPRpositivesera，andwassensitiveandspecific．Accordingtothetestresultsof129goat(Caprehircus)serumsamples，theC

8、-ELISAestabl