抗蓝舌病病毒VP6和VP7蛋白单克隆抗体的制备及鉴定.pdf

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1、第34卷第5期中国预防兽医学报Ve1．34．NO．52012年5月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineMay．2012doi：10．39698．issn．1008-0589．2012．05．18抗蓝舌病病毒VP6和VP7蛋白单克隆抗体的制备及鉴定魏鹏，孙恩成，刘霓红，杨涛1,2，徐青元，秦永丽，赵晶，冯瑜菲，一，王文世，张翠云一，吴东来(1．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／农业部兽医公共卫生重点开放实验室，黑龙江哈尔滨150001；2．东北农业大学动物医学学院，黑龙江哈尔滨150030；3．湖南农业大学动物医学

2、学院，湖南长沙410128)摘要：为制备针对蓝舌病病毒(BTV)的单克隆抗体(MAb)，本研究利用血清型1型BTV(BTV1)免疫BALB／c鼠，将其脾淋巴细胞与SP2／0进行融合，并用BTV1包被ELISA板，通过间接ELISA方法筛选出3株稳定分泌抗BTV1的MAb的杂交瘤细胞株(2B10、3D4和4H8)。利用表达BTV1主要蛋白的真核表达重组质粒转染BHK-2l后，对所制备的杂交瘤细胞株上清进行间接免疫荧光(IFA)以及westernblot鉴定，结果显示：2B10和4H8与VP7蛋白反应，而3D4与VP6蛋白反应。同时，IFA鉴定结果进一步表明，3株MAb与24个血清型的BTv

3、均可以发生反应。本研究制备的MAb为建立BTV免疫学检测方法和相关病毒蛋白的功能研究奠定了基础。关键词：蓝舌病病毒；单克隆抗体；VP6蛋白；VP7蛋白中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：1008—0589(2012)05—0412—03PreparationandidentificationofmonoclonalantibodiesagainstVP6andVP7ofbluetonguevirusWEIPeng。，SUNEn-cheng，LIUNi-hong，YANGTao，XUQing—yuan，QIyYong-li，ZHA0Jing，FENGYu—fei’。，WANG

4、Wen-shi。，ZHANGCui-yun，WUDong—lai(1．KeyLaboratoryofVeterinaryPublicHealth，MinistryofAgricultural，StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology，HarbinVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Harbin150001，China；2．CollegeofAnimalMedicine，NortheastAgriculturalUniversity，Harbin150

5、030，China；3CollegeofAnimalMedicine，HuNanAgriculturalUniversity，Changsha410128，China)Abstract：Toprepareamonoclonalantibody(MAb)againstBluetonguevirus(BTV)，BALB／cmicewereimmunizedwithBTV1andtheimmunizedmicespleenmyelomacellswerefusedwithSP2／0，thenthreeMAbs(2B10，3D4and4H8)againstBTVwerescreenedbyind

6、irectELISAcoatedwithBTV1．TheMAbswereidentifedbyindirectimmunofluorescenceassay(IFA)andwesternblot．theresultsshowedthattheMAbsof2B10and4H8werereactedwithBTVVP6and3D4withVP7protein，whichwereexpressedintransfectedBHK一21cellswitheukaryocyterecombinantplasmids．Furthermore，IFAidentificationindicatedtha

7、talltheMAbswerereactedtoBTV1to24serotypes．TheMAbspreparedinthisstudyoreusefultoolsfordevelopingimmunologicaldiagnostictechniquesofBTVandinvestigatingproteinsrelatedtoBTV．Keywords：bluetonguevirus；monoclonalantibody；VP6；