抗蓝舌病病毒VP7和NS2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定.pdf

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1、第33卷第l0期中国预防兽医学报VO1．33．NO．102011年10月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine0ct．2011doi：10．3969／j．issn．1008-0589．2011．10．15抗蓝舌病病毒VP7和NS2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定秦永丽，孙恩成，耿宏伟1,2，杨涛，刘霓红，赵晶，王凌风，徐青元，蔡绪禹，李文京。，吴东来(1．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／农业部兽医公共卫生重点开放实验室，黑龙江哈尔滨150001；2．

2、东北农业大学动物医学学院，黑龙江哈尔滨150030；3．中国动物疫病预防控制中心，北京100125)摘要：为建立蓝舌病病毒(BTV)的检测方法和研究该病毒蛋白的功能，本研究利用BTV血清8型(BTV8)免疫BALB／c小鼠，取免疫后的小鼠脾淋巴细胞与SP2／0细胞融合，制备单克隆抗体(MAb)。并以BTV8作为包被抗原建立间接ELISA方法，经筛选获得了8株稳定分泌抗BTV8MAb的杂交瘤细胞株(1B2、1F6、2B1、2D10、3B6、3D9、4D4和4D12)。Westemblot结果显示，MAb1F6、2B1、2

3、D10、3B6、3D9与BTV8VP7蛋白反应，MAbB2、4D4、4D12与BTV8NS2蛋白反应。间接免疫荧光结果显示，该8株MAb与24型BTV血清型呈不同的反应谱系。本研究所获得的MAb为建立BTV免疫学检测方法和相关病毒蛋白的功能研究提供了实验依据。关键词：蓝舌病病毒；VP7蛋白；NS2蛋白；单克隆抗体中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：1008—0589(2011)10-0816-04ProductionandidentifiCatiOnofmonoclonalantibodiesagains

4、tVP7andNS2ofbluetonguevirusQrNYong—li。，SUNEn—cheng，GENGHong—wei，YANGTao，LIUNi-hong，ZHAOJing，WANGLing—feng，XUQing—yuan，CAIXu—yu，LIWen-jing。，wuDong-lai(1．KeyLaboratoryofVeterinaryPublicHealth，MinistryofAgricultural，StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology，Harbi

5、nVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Harbin150001，China；2．CollegeofAnimalMedicine，NortheastAgriculturalUniversity，Harbin150030，China；3．ChinaAnimalDiseaseControlCenter，Beijing100125，China)Abstract：Topreparemonocloneantibody(MAb)agains

6、tbluetonguevirus(BTV)，SP2／0myelomacellswerefusedwithspleencellsofBALB／cmiceimmunizedwichBTVserotype8．andscreenedbyindirectELISAcoatedwithBTV8．EightMAbs(1B2，1F6，2B1，2D10，3B6，3D9，4D4and4D12)againstBTVwereproduced．TheresultofwestemblotindicatedthattheMAbsof1F6，2B1，

7、2D10，3B6，3D9reactedtoVP7protein，andtherestofMAbsreactedtoNS2protein．TheresultsofIFAshowedthatalltheMAbshaddifferentreactivitywithBTV1-24serotypes．TheMAbsproducedinthisstudyareusefultoolsfordevelopingimmunologicaldiagnostictechniquesofBTVandinvestigatingproteinsr

8、elatedtoBTV．Keywords：bluetonguevirus；VP7：NS2；monoclonalantibody蓝舌病(Bluetongue，BT)是由呼肠孤病毒科环状和野生反刍动物等⋯。感染动物的平均病死率为病毒属的BT病毒(BTV)~I起的，主要由库蠓传播的30％，其中绵羊的病死率可高达80％【2_。世界动物反刍