猫血清IgG的纯化及酶标兔抗猫二抗的制备.pdf

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1、·实验研穷·匡地苣灌目2O1O年第7期豆第268期第3l卷猫血清IgG的纯化及酶标兔抗猫二抗的制备粱传军，牛彦，王亚晶，黄海欧(1．九台市动物检疫站，吉林九台130500；2．长春市动物检疫站，吉林长春130000)【摘要】采用辛酸一硫酸铵法和SephadexG-150分子筛层析法纯化猫血清IgG，SDS—PAGE电泳检测；用纯化的IgG免疫新西兰兔，制备兔抗猫IgG抗血清，并用上述方法提纯兔抗猫IgG，改良过碘酸钠法标记辣根过氧化物酶，即获得兔抗猫IgG的酶标抗体。【关键词】酶标抗体；兔抗猫血清IgG；间接ELISA【中图分类号]$852．5【文献标识码】A【文章编号]1672—2

2、078(2010)07—0008—03PreparationofEnzymeLinkedAnti—CatIgGofRabbitLIANGChuan-junl,NUYanz,WANGYa-jing~，HUANGHai-OU2(1．AnimalQuarantineSt~ioninJiutai，JiutaiJilin130500；2．AnimalQuarantineStrtioninChangchun，ChangchunJilin130000)[Abstract]It’Sshouldpurifycat’SIgGwithoctoicacid—ammoniumsulphateandmolecu

3、larsievechromatography．ThenitneedsimmunizatedNewZealandrabbitaddingFreunda~uvant．AfterthatwehavedoneTrialingbleedingwithdoubleagardifusionandwhenpotencyreachupto64tobegintogetbloodandseparationconyblood—serum．Thenwehavepuri-fledrabbit’SIgGwithoctoicacid—amoniumsulphateandmolecularsievechromatog

4、raphy．Finally,therabbit’SIgGislin-kedwithHRPusingreformingodiumiodatemethod．Besideswehaveshudedtheapproachingandpurificationmethodandgotsuitabletechniqueline．PreliminaryutilizationalsohaveprovedthehighperformanceofRabbitanti-catIgG／HRP．[KeywordslHRP；Rabbitanti—catIgG；indirectELISA酶联免疫吸附试验(ELIsA

5、)已广泛用于各种(HI)(鼎国生物)；HiTrapProteinGHP(Amersham)；畜禽疾病的诊断和抗体的检测，而制备高效价特低分子量标准蛋白质(中科院上海生化研究所)；异性酶标二抗是关键。由于目前国内抗猫IgG的速眠新(长春军事兽医研究所)。阴性血清为本室酶标抗体尚未商品化，给科学研究带来不便，本研保存。究通过纯化猫血清IgG，进一步制备兔抗猫IgG酶1-3猫IgG的提纯标抗体，为建立ELISA方法以及诊断试剂盒的研猫经速眠新麻醉后，心脏采血，离心收集血制奠定基础。清。按照参考文献“捌方法用辛酸一硫酸胺法提纯l材料猫IgG，SephadexG-150分子筛层析法进一步提纯，

6、按文献介绍的方法分段收集样品。1．1实验动物1．4蛋白含量的测定猫，新西兰兔，由吉林大学实验动物中心提供。紫外分光光度法测定蛋白，分光光度计预热1．2试验材料后在280ILrn波长下用O．01mol／LPBS缓冲液调零，正辛酸(国药集团化学试剂有限公司)；硫酸测定IgG溶液在280am波长下的OD值，IgG溶液铵(天津市光复精细化工研究所)；Freund，sAdjuvant，每OD值相当于1．35mg蛋白计算蛋白浓度。Complete和Freund，sAdjuvant，Incomplete(SIGMA1．5SDS．PAGE纯度检测公司)；葡聚糖G一150(Pharmacia)辣根过氧

7、化物酶按文献配制浓度为5％的积层胶和浓度为l2％的分离胶，电泳后考马斯亮蓝R．250于摇床上染色过夜，脱色观察结果。收稿日期：2010年5月7日·8·电话O431—87989877／86814288／868l4188E-mail：jlxmsy@163．corn匡址芷塑豳·实验硼究·2010年第7期总第268期第3l卷1．6兔抗猫IgG抗血清的制备现出两条清晰带，分子量约为55KDa和25KDa。选取成年健康的试验新西兰兔，第一次免疫取0．5mg／kg剂量的