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时间:2020-05-18
《猫血清IgG的纯化及酶标兔抗猫二抗的制备.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、·实验研穷·匡地苣灌目2O1O年第7期豆第268期第3l卷猫血清IgG的纯化及酶标兔抗猫二抗的制备粱传军,牛彦,王亚晶,黄海欧(1.九台市动物检疫站,吉林九台130500;2.长春市动物检疫站,吉林长春130000)【摘要】采用辛酸一硫酸铵法和SephadexG-150分子筛层析法纯化猫血清IgG,SDS—PAGE电泳检测;用纯化的IgG免疫新西兰兔,制备兔抗猫IgG抗血清,并用上述方法提纯兔抗猫IgG,改良过碘酸钠法标记辣根过氧化物酶,即获得兔抗猫IgG的酶标抗体。【关键词】酶标抗体;兔抗猫血清IgG;间接ELISA【中图分类号]$852.5【文献标识码】A【文章编号]1672—2
2、078(2010)07—0008—03PreparationofEnzymeLinkedAnti—CatIgGofRabbitLIANGChuan-junl,NUYanz,WANGYa-jing~,HUANGHai-OU2(1.AnimalQuarantineSt~ioninJiutai,JiutaiJilin130500;2.AnimalQuarantineStrtioninChangchun,ChangchunJilin130000)[Abstract]It’Sshouldpurifycat’SIgGwithoctoicacid—ammoniumsulphateandmolecu
3、larsievechromatography.ThenitneedsimmunizatedNewZealandrabbitaddingFreunda~uvant.AfterthatwehavedoneTrialingbleedingwithdoubleagardifusionandwhenpotencyreachupto64tobegintogetbloodandseparationconyblood—serum.Thenwehavepuri-fledrabbit’SIgGwithoctoicacid—amoniumsulphateandmolecularsievechromatog
4、raphy.Finally,therabbit’SIgGislin-kedwithHRPusingreformingodiumiodatemethod.Besideswehaveshudedtheapproachingandpurificationmethodandgotsuitabletechniqueline.PreliminaryutilizationalsohaveprovedthehighperformanceofRabbitanti-catIgG/HRP.[KeywordslHRP;Rabbitanti—catIgG;indirectELISA酶联免疫吸附试验(ELIsA
5、)已广泛用于各种(HI)(鼎国生物);HiTrapProteinGHP(Amersham);畜禽疾病的诊断和抗体的检测,而制备高效价特低分子量标准蛋白质(中科院上海生化研究所);异性酶标二抗是关键。由于目前国内抗猫IgG的速眠新(长春军事兽医研究所)。阴性血清为本室酶标抗体尚未商品化,给科学研究带来不便,本研保存。究通过纯化猫血清IgG,进一步制备兔抗猫IgG酶1-3猫IgG的提纯标抗体,为建立ELISA方法以及诊断试剂盒的研猫经速眠新麻醉后,心脏采血,离心收集血制奠定基础。清。按照参考文献“捌方法用辛酸一硫酸胺法提纯l材料猫IgG,SephadexG-150分子筛层析法进一步提纯,
6、按文献介绍的方法分段收集样品。1.1实验动物1.4蛋白含量的测定猫,新西兰兔,由吉林大学实验动物中心提供。紫外分光光度法测定蛋白,分光光度计预热1.2试验材料后在280ILrn波长下用O.01mol/LPBS缓冲液调零,正辛酸(国药集团化学试剂有限公司);硫酸测定IgG溶液在280am波长下的OD值,IgG溶液铵(天津市光复精细化工研究所);Freund,sAdjuvant,每OD值相当于1.35mg蛋白计算蛋白浓度。Complete和Freund,sAdjuvant,Incomplete(SIGMA1.5SDS.PAGE纯度检测公司);葡聚糖G一150(Pharmacia)辣根过氧
7、化物酶按文献配制浓度为5%的积层胶和浓度为l2%的分离胶,电泳后考马斯亮蓝R.250于摇床上染色过夜,脱色观察结果。收稿日期:2010年5月7日·8·电话O431—87989877/86814288/868l4188E-mail:jlxmsy@163.corn匡址芷塑豳·实验硼究·2010年第7期总第268期第3l卷1.6兔抗猫IgG抗血清的制备现出两条清晰带,分子量约为55KDa和25KDa。选取成年健康的试验新西兰兔,第一次免疫取0.5mg/kg剂量的
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