传染性胰坏死病毒双抗体夹心 ELISA检测方法的建立-论文.pdf

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1、第44卷第4期淡水渔业2014年7月Vo1．44NO．4FreshwaterFisheriesJu1．2014传染性胰坏死病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立张琳琳，连科迅，张英，蒋烨，姜艳萍，崔文，乔薪瑗，唐丽杰，李一经，刘敏(1．东北农业大学动物科学与技术学院，哈尔滨150030；2．东北农业大学动物医学学院，哈尔滨150030)摘要：以纯化的兔抗传染性胰坏死病病毒(IPNV)VP2重组蛋白多克隆抗体为包被抗体，抗IPNVVP2单克隆抗体为检测抗体建立了IPNV双抗体夹心ELISA方法。优化反应条件为：兔抗IPNVVP2重组蛋白多克隆抗体包被浓度为1．28mL，抗IPNVVP2单

2、克隆抗体的工作浓度为1．34g／mL，酶标二抗稀释比例为1：2000，以P／N>2，且OD>0．101494作为阳性判定标准。该方法的重复性变异系数均小于10％，与传染性造血器官坏死病毒(IHNV)、病毒性出血败血症病毒(VHSV)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)、轮状病毒(HRV)无交叉反应。对41份虹鳟肝脏样品分别进行双抗体夹心ELISA和RT—PCR检测，结果双抗体夹心法与RT．PCR法检测符合率为97％，表明本实验建立的双抗体夹心ELISA检测方法检测IPNV具有较高的敏感性和特异性，可用于IPNV的病原学检测。关键词：传染性胰坏死病毒；双抗体夹心ELISA检测方法；单克隆抗体；

3、兔抗血清中图分类号：$941．41文献标识码：A文章编号：1000—6907一(2014)04-0057-06DevelopmentofadoubleantibodysandwichELISAfordetectionofinfectiouspancreaticnecrosisvirusZHANGLin—lin，LIANKe—xun，ZHANGYing，JIANGYe，JIANGYan—ping，CUIWen，QIAOXin—yuan，TANGLi-jie，LIYi-jing，LIUMin(1．CollegeofAnimalScienceandTechnology，NortheastAg

4、riculturalUniversity，Harbin150030，China；2．CollegeofVeterinaryMedicine，rtheastAgriculturalUniversity，rbin150030．ina)Abstract：Adouble—antibodysandwichELISA(DAS—ELISA)wasdevelopedusingpurifiedpolyclonalantibodyandmono—clonalantibody(MAb)againstviralinfectiouspancreaticnecrosisvirus(IPNV)VP'2protein

5、ascaptureanddetectoranti·body，respectively．Theoptimizedreactionconditionsincludedcoatingwith100ixL／wellofpurifiedpolyclonalantibodyatconcentrationof1．28mL，probingwiththeworkingconcentrationof1．34mLIgGfromtheMAbdilutingHRP—conjugatedantibodywiththeproportionof1：2000andjudgingwithP／N>2andOD49o=0．1

6、01494aspositivecriteria．TheDAS—ELISAwasspecificdetectionofIPNV，butnocross—reactionwithIHNV，VHSV，SVCV，HRVandinter—assaycoeficientofvariabilitywerewithin10％．Inaddition，atotalof41liversofrainbowtroutsamplesweretestedbytheI)AS—ELISAandPT—PCR．andthecoincidencewas97％betweenDAS．ELISAandPT—PCR．Thesedata

7、demonstratedthattheDAS—ELISAwasspecificandsensitive，andprovidedausefultoolfordiagnosisofIPNVinfection．Keywords：infectiouspancreaticnecrosisvirus；doubleantibodysandwichELISA；MAb；rabbitantisera传染性胰坏死病病毒(infectiouspancreaticnec