鸡肾型传染性支气管炎病毒的分离与鉴定.pdf

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1、攀ZUl1．／鸡肾型传染惶支气管炎病专的分禹与鉴定谭兴智(烟台开发区兽医卫生监督检验所，山东264006)摘要：自两个鸡场发病鸡群分离到两个肾型IBV毒株，分别命名为F1、F2株，并对其培养特性、理化特性、血凝性、致病性、免疫学特性以及对新城疫病毒的干扰性等方面进行研究。结果表明，两个毒株均能导致鸡胚感染，引起鸡胚出血、萎缩、绒毛尿囊膜增厚；IBV分离株对乙醚敏感，对酸碱有一定的耐性，属有囊膜病毒。该病毒不耐热，56℃30min即能灭活；分离株均能抑制鸡新城疫病毒B株在鸡胚中繁殖：分离株回归42日龄雏鸡后从第3天开始发病，发病率为100％

2、．病死率为20％~30％。此外，用本病毒制备的油乳剂灭活苗，基本上可抵抗该毒株的攻击。关键词：肾型IBV毒株；鸡胚；分离；鉴定中图分类号：$852．65文献标识码：B文章编号：1673—1085(2011)07—0016—04鸡传染性支气管炎(Infectiousbronchitis，IB)是组、插入、缺失等途径发生变异，故IBV血清型较由鸡传染性支气管炎病毒(IBV)引起的一种急性、多I21。多数血清型病毒可引起明显的呼吸道症状。高度接触传染性的疾病。感染鸡以气管哕音、咳嗽、但某些血清型的病毒明显的损害。肾脏。而不引起或喷嚏为主要特征。

3、在雏鸡，还可出现流涕、产蛋鸡产只引起轻微的呼吸道症状。根据现有的资料表明，蛋量下降和蛋的质量变劣l1I。感染鸡生长受阻，耗料常引起肾脏损害的主要是Australian“T”、Hotle及增加，死亡率增加，给养鸡业造成巨大经济损失。该Grag、Massachussetts等血清型的某些毒株『31。病具有高度传染性，虽然IBV疫苗免疫在一定程度1材料和方法上能够预防本病的发生，但是由于IBV血清型比较1．1材料多，不同毒株间交叉反应性比较低甚至没有，加之1．1．1毒株标准Gray株、Massachussetts(以下简新的变异株不断出现，使临

4、床表现趋于多样化，给称Mass)株和NDV—B株，均由浙江大学预防兽医IB的诊断和防制带来了很大的困难。研究所周继勇教授馈赠。鸡传染性支气管炎病毒(Avianctious1．1．2病料感染肾型传染性支气管炎的病鸡肾bronchitisvirus，IBV)属于冠状病毒科(Coronaviridae)脏和气管。冠状病毒属(Coronavirus)中的一个代表种。多数呈1．1．3鸡胚泰伟食品有限公司提供的9～l1日圆形，直径约80～120nm。基因组为单股正链RNA，龄鸡胚。长27kb。病毒粒子带有囊膜和纤突。IBV含有3种1．1．4化学试剂乙

5、醚，0．1mol／LHC1，5．6％NaHC0，病毒特异蛋白质，纤突(S)和膜(M)糖蛋白以及内灭菌生理盐水，双抗(青霉素和链霉素)，庆大霉部核衣壳(N)蛋白。蛋白由两种糖多肽S1和S2，各素，3％胰蛋白酶等。2～3个拷贝构成，血凝抑制和大多数中和抗体都1．1．5试验设备培养箱，离心机，照蛋器，冰箱等。是由S1引起。由于S基因易通过点突变、基因重1．2方法收稿日期：2011—06—201．2．1病毒的分离取呼吸道症状明显、’肾脏肿16科学养禽，，0．)Ce，zCe大苍白的病死鸡的肾脏和气管等组织研磨后．用灭1．2．4．1琼扩试验(AGP)

6、将收集的各5-6代鸡胚菌生理盐水制成1：5乳剂，加入双抗和庆大霉素，尿囊液，分别同IBV—Gray株阳性血清作AGP试验。经4℃作用6h，3000rpm离心10min．上清液经无菌1．2．4．2血凝试验(HA)将各毒株的鸡胚尿囊液检验合格后接种9—1】日龄鸡胚尿囊腔，0．1ml／胚．与3％胰蛋白酶作1：1混合．置37c【=水浴．间隔每次接种10枚鸡胚，置37c【=温箱中孵育，孵化过10min摇动1次，充分作用4h。胰酶处理前后按常程中每12h照蛋1次，弃去24h内死亡鸡胚。48h规方法作HA试验。后收集尿囊液继续传代，在鸡胚中盲传4代『5

7、1。1．2．4．3血凝抑制试验(HI)利用IBV—Gray株、1．2．2鸡胚的培养特性将分离的IBV分别作Mass两种阳性血清．分别同各种分离毒株病毒液100倍和200倍稀释，将30枚9日龄鸡胚分为三作HI试验。组。100倍稀释的IBV接种10枚鸡胚．200倍稀释1．2．5IBV对NDV的干扰试验将30枚9日龄的IBV接种1O枚鸡胚．其余1O枚鸡胚作为对照鸡胚分为二组，每组15枚，一组尿囊腔接种100接种灭菌生理盐水，尿囊腔接种，0．1ml／胚，继续置倍稀释的IBV，0．1ml／胚．另一组用同样的方法接37℃孵化。每天记录死胚数，余下活胚

8、于19日龄种灭菌生理盐水．接种后鸡胚继续在37℃孵育时剖检，将胚胎分别称重，计算平均胚重。10h，然后所有鸡胚接种10倍稀释的NDV—B弱毒1．2．3病毒的理化特性鉴定株(接种方法同前)f61