鸡传染性支气管炎病毒山东株分离鉴定及其灭活疫苗制备与评价

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1、分类号：S852.65单位代码：10183研究生学号：201385Z009密级：公开吉林大学博士学位论文鸡传染性支气管炎病毒山东株分离鉴定及其灭活疫苗制备与评价Isolation,characterizationofinfectiousbronchitisvirusShandongstrain,andthepreparationandevaluationofitsinactivatedvaccine作者姓名：苗立中专业：兽医博士研究方向：兽医技术服务指导教师：韩文瑜教授培养单位：动物医学学院2018年6月鸡传染性支气管炎病毒山东株分离鉴定及其灭活疫苗

2、制备与评价ｔｒｒＩｓｏｌａｉｏｎｃｈａａｃｔｅｉｚａｔｉｏｎｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓｖｉｒｕｓ，Ｓｈａｎｄｏｎｇｓｔｒａｉｎ，ａｎｄｔｈｅｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｉｔｓｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄｖａｃｃｉｎｅ作者姓名？．苗立中专业名称：兽医博士研究方向：兽医技术服务指导教师：韩文瑜教授学位类别：兽医博士培养单位：动物医学学院论文答辩日期：年６月＞日授予学位日期：年月曰答辩委员会组成：姓名职称工作单位主席周锐教授华

3、中农业大委员范红结教授南京农业大学朱国强教授扬州大学刘思国研宄员中国农科院哈尔滨兽医研宄所钱爱东教授吉林农业大学邓旭明教授吉林大学丁壮教授吉林大学未经本论文作者的书面授权，依湾收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租（但纯学术性使用、改编等有碍作者著作权的商业性使用。否则。不在此限），应承担侵权的法律责任吉林大学博士或硕士）学位论文原创性声明（本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导

4、，立工。已经注的内容下独进行研宄作所取得的成果除文中明引用己经品含任何其他人或集体发表或撰写过的作成外，本论文不包个出重己明。本的研究做要贡献的个人和集体，均在文中以确果对文。。识的法律结由本人担方式标明本人完全意到本声明果承：学位论文作者签名４：曰曰期年月（／Ｉ中文摘要鸡传染性支气管炎病毒山东株分离鉴定及其灭活疫苗制备与评价鸡传染性支气管炎(InfectiousBronchitis，IB)是一种有重大经济影响且呈全球分布的家禽疾病。它由鸡传染性支气管炎病毒（Avianinfectiousbronchitisvirus，IBV）

5、引起，是危害我国养禽业健康养殖的重要疫病。目前已有多种商品化疫苗用于IB的免疫预防，但由于IBV的高变异性、不同血清型之间缺乏交叉保护等原因，IB并未得到有效控制，IBV的综合防控仍然存在着大量难题。鉴于此，本研究对流行病学检测阳性样品进行IBV野毒株分离鉴定及其主要蛋白遗传变异性分析；并基于分离毒株建立IBV快速检测方法，包括荧光定量PCR检测方法和间接ELISA抗体检测方法，利用建立的检测方法对山东地区开展流行病学调查；对分离鉴定的部分毒株进行细胞培养条件的优化，确立最佳培养方法；利用细胞培养的病毒液配制灭活疫苗，探讨灭活疫苗的免疫效果，以期为IB

6、V的早期诊断、流行病学调查、致病机制研究、遗传变异趋势研究、疫苗的制备和检验技术研究奠定基础，为山东地区IBV综合防控措施的制定提供科学依据。为对山东地区疑似IBV感染临床病例进行病原的分离与鉴定，并掌握分离毒株的生物学特性和遗传特征，本研究进行了病毒分离、血凝实验、鸡胚致病性、动物回归等系列试验。结果共获得分离毒株48株，对SPF鸡胚的EID-5.0/0.150为10mL～10-5.83/0.1mL，均能引起SPF雏鸡表现典型的IBV感染症状，对SPF雏鸡的致死性介于30%～60%，遗传进化分析显示48株分离毒株中有46株QX基因型，2株Mass基因

7、型，表明QX基因型已成为山东地区IBV流行的优势基因型。基于分离QX基因型毒株建立IBV荧光定量PCR检测方法并组装试剂盒，检测分离毒株的器官嗜性和疫苗攻毒保护试验的排毒量，同时为IBV感染的早期诊断和流行病学调查提供新的检测方法。结果显示：该检测方法的标准曲线线性关系良好，相关系数R2为0.9988，可检测到7.5×103copies/μL的病毒核酸，比常规RT-PCR的敏感性高100倍；特异性检测结果显示检测MDV、NDV、IBDV、ILTV等其他禽源类病毒均为阴性；批内重复试验和批间重复试验变异系数均小于3%；利用该试剂盒检测192份临床送检病料

8、，检测出阳性样品48份，阳性I率达25.0%（48/192），显著高于普通PCR检测方法。以上