鸡腺胃型传染性支气管炎病毒山东分离株S基因的克隆及序列分析.pdf

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1、动物医学进展。2015，36(6)：104—110ProgressinVeterinaryMedicine鸡腺胃型传染性支气管炎病毒山东分离株S基因的克隆及序列分析王玉东，刘俊辉，郑增忍，王君玮，王永玲，王晓燕，王树双，牛钟相。(1．中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛266032；2．中国农业大学国际合作与交流处，北京100083；3．山东农业大学动物科技学院，山东泰安271018)摘要：为研究3株鸡腺胃型传染性支气管炎病毒(IBV)山东分离株(青岛腺胃株Qx株、东营腺胃株DY株、肥城腺胃株FC株)病毒纤突蛋白基因(s基因)的核苷酸特征，与呼吸型M41标

2、准株及肾型IBV进行S基因核苷酸进行同源性比较。采用RT—PCR技术方法，对IBV分离株(QX、DY、FC)及标准毒株M41株S基因进行克隆和序列测定，对其中QX和DY株S基因核苷酸分别用3种方法(ClustalVmethod、Jo—tunHeinmethod和ClustalWmethod)对获得的基因核苷酸序列进行分析。结果显示，Qx株和DY株的s基因核苷酸与标准毒株M41株S基因核苷酸的同源性最高为79．3和79．2，最小差异性为24．59／6和22．3。QX株和DY株与肾型IB分离株HD同源性最高为78．4和78．9，最小差异性均为22．7。HD株与

3、M41株的同源性最高达到8O．8。通过对S基因进化关系分析，说明腺胃型IBV山东分离株(QX、DY株)与呼吸型和肾型IBV是引起不同组织嗜性的IBV变异株，与呼吸型IBV和肾型IBV有明显的差异，是在IBV遗传变异进化过程中具有重要地位的进化阶段。关键词：鸡；传染性支气管炎病毒；腺胃型；s基因；序列分析中图分类号：$852．659．1文献标识码：A文章编号：1007—5038(2015)06—0104—07传染性支气管炎病毒(Infectiousbronchitisvi—Qx样IBV。AbroSH等对IBV—Qx病毒血清型rus，IBV)粒子主要包括3种主

4、要结构蛋白，分别为按全基因序列分型，除了中国QXIBV血清型外，欧纤突蛋白(S)、膜糖蛋白(M)、内部核衣壳蛋白(N)，洲多个国家分离到IBV—QX样血清型，包括法国、德此外还有少量的第4种蛋白(小膜蛋白，E)_1]。病国、意大利、荷兰、波兰、俄罗斯、西班牙、瑞典和英国毒的纤突蛋白s蛋白由S1和s2两种糖蛋白组成，等都有相关报道，其分离毒株的S1基因序列都与血凝抑制抗体和大部分病毒的中和抗体都是由s1QX1BV接近。SigristB等口叩报道在瑞士发现了冠诱导产生，具有免疫保护作用；据谢景伟等报道，状病毒IBV—QX型感染的病例。GanapathyK等_1

5、l_S1基因变异最大，是该病毒主要的抗原基因。因此报道英国从商品肉鸡腺胃炎病例中分离到Qx样本研究设计了一对S1和S2引物，对S蛋白基因核IBV。ZhangXR等报道了来源于SPF鸡IBV苷酸进行克隆及序列分析。l998年王玉东等首纤突蛋白在重组马立克病病毒的表达；AminOGM次报道了中国发生了腺胃型IB，并将青岛分离株命等口。报道了Qx样IBV毒株在中东的传播，并对许名为QXIBV。潘杰彦等报道中国青岛腺胃型多国家的病毒分离株进行了基因进化分析。MorkIBV株(QXIBV株又称SD／97／02株)的S1基因全AK等]报道了冠状病毒IBV—QX株和B1

6、648病序列及推导出的氨基酸序列被病毒基因库(Gen—毒纤突蛋白特性的比较。QX样IBV感染病例呈现Bank)所收录，收录号为AF193423。张小荣等分世界范围蔓延的趋势。离的2株河北分离IBV株属于QXIBV基因型。为研究腺胃型IBV山东分离株Qx和DY及GeerligsHJ等l_7]研制了一种Qx样IBV活疫FC的病毒S蛋白的核苷酸特征，确认其与肾型IBV苗，其病毒毒株与QXIBV的同源性高达98．1。和呼吸型IBV的同源性。采用分子生物学技术近年来亚洲、欧洲和非洲都有大量IBV—QX样病毒(RT—PCR试验方法)，对多株IBV毒株进行了纤突感染和发

7、病的报道。ToffanA等报道非洲发生蛋白S基因的扩增，并对QX和DY株的S基因扩收稿日期：2014-10—08作者简介：王玉东(1964一)，男，山东临朐人，副研究员，主要从事预防兽医学研究。*通讯作者王玉东等：鸡腺胃型传染性支气管炎病毒山东分离株S基因的克隆及序列分析105增产物核苷酸序列进行分析，表明腺胃型IBV是不异丙醇混匀，在一20℃放置过夜。12000r／rain离同于呼吸型IBV和肾型IBV的一种具有明显腺胃心15rain，缓慢倒掉上清，沿管壁缓慢加750mI／L嗜性的IBV变异株。乙醇0．5mL进行洗涤一次，缓慢倒掉750mL／I乙1材料与

8、方法醇，倒扣于吸水纸上，置超净工作台晾干，加入2o“LDEPC处理