鸡传染性支气管炎病毒xt株的分离鉴定及s1基因、m基因的序列分析

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1、AGRICULTURALUNIVERSITYOFHEBEI硕士学位（毕业）论文鸡传染性支气管炎病毒XT株的分离鉴定及SI基因、M基因的序列分析学位申请人孙苗指导教师李铁拴教授学科专业临床兽医学学位类别农学硕士授予单位河北农业大学答辩曰期二〇一五年五月二十四日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除丫文中特別加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得河北农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明

2、并表示谢意。学位论文作者签名：孙苗签字日期：ixm年沪月曰学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解河北农业大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被査阅和借阅。本人授权河北农业大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书）签字日期令年t月日学位论文作者毕业后去向工作单位通讯地址:邮编:分类号：S857.2单位代码：10086密级：公开学号：2012367鸡传染性支气管炎病毒XT株的分离鉴定及S1基因、

3、M基因的序列分析IsolationandidentificationaswellasS1geneandMgenesequenceanalysisofAvianInfectiousBronchitisVirusXTstrain学位申请人：孙苗指导教师：李铁拴教授学科专业：临床兽医学学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一五年五月二十四日摘要本研究从北京某集团公司邢台地区的肉鸡场，采集疑似鸡传染性支气管炎的发病鸡病料，从中分离得到一株病毒,命名为XT株，并对其理化及生物学特性进行鉴定，最终通过基因的测序、对比，来分析它的遗传变异性。无菌采集疑似患传染

4、性支气管炎病鸡的气管、肾脏、腺胃等，研磨制成病毒液，在10日龄SPF鸡胚上传代，并收集尿囊液。尿囊液对鸡红细胞无直接血凝性，经1%胰酶处理后出现血凝现象；新城疫干扰试验显示XT株F5代尿囊液对新城疫Lasota株在鸡胚中的复制具有干扰作用，使其血凝效价下降了2～3个值；将XT株F5代尿囊液接种10日龄鸡胚144h后，与对照组相比，试验组鸡胚发育迟缓，经SPSSV17分析两组鸡胚体重差异极显著，说明XT株对鸡胚具有致矮小作用；病毒回归试验动物后，鸡只出现了典型的IBV临床及解剖症状，且采集所有鸡只病料分离得到的病毒液，经IBVRT-PCR诊断试剂盒检测，对照组均为

5、阴性，试验组绝大多数为阳性，说明试验鸡不同程度的感染了IBV。XT株理化特性试验表明：该病毒对酸（pH3.0）碱(pH11.0)均敏感，并且病毒对酸的耐受力要比对碱的耐受力略强；经56℃，1h水浴加热，毒力下降了3个滴度，2+2+而添加Mg组毒力下降不到2个滴度，说明病毒对热敏感，Mg能提高其耐热性；病毒对有机溶剂乙醚、氯仿均敏感，处理后毒力均下降了2～3个滴度，以上特性均符合传染性支气管炎病毒的相关特性。经测定，XT株F5代病毒液的EID50为-5.6910/0.1ml；血清交叉中和试验结果显示：XT株与传支疫苗株H120、W93的关系系数分别为77.98%、

6、44.88%，依据判定标准（R>80%，两毒株为同一亚型；25%

7、基因高，说明M基因较S1基因保守。序列对比结果显示：XT株与当前国内广泛使用的疫苗株同源性较低，与一株山东分离株WF同源性较高。关键词：鸡传染性支气管炎病毒；XT株；S1基因；M基因；同源性IsolationandidentificationaswellasS1geneandMgenesequenceanalysisofAvianInfectiousBronchitisVirusXTstrainMastercandidate:SunMiaoAdvisor:prof.LiTieshuanMajor:ClinicalVeterinaryMedicineAbstrac

8、tInthisstudy